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標(biāo)簽:脫氫抗壞血酸(dehydroascorbate DHA)含量測定試劑盒
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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
脫氫抗壞血酸(dehydroascorbate,DHA)含量測定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63612 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
AsA作為植物細(xì)胞一個重要生理指標(biāo),其AsA 的含量、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA 比率)及其合成與代謝相關(guān)酶類活性的變化涉及植物對一系列環(huán)境脅迫的響應(yīng)。DHA是AsA的可逆的氧化型,在生物體內(nèi),與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng),具有電子受體的作用。
測定原理:
DTT還原DHA生成AsA,通過測定體系中AsA的生成速率,即可計算出DHA含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100 mL×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體16mL×1瓶,室溫保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加入5.743 mL蒸餾水充分溶解;吸取0.1 mL上述溶液,加入0.9 mL蒸餾水,混勻,即為100μmol/L DHA。
樣品中DHA提?。?/span>
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。12000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);12000g,4℃離心10min,取上清液置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
DHA測定操作:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到265 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL標(biāo)準(zhǔn)液、160μL預(yù)熱的試劑二和20μL試劑三,迅速混勻后于265nm比色,記錄10s和130s的吸光值A1和A2,△A空白管=A2-A1。
4. 測定管:依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL上清液、160μL預(yù)熱的試劑二和20μL試劑三,迅速混勻后于265nm比色,記錄10s和130s的吸光值A3和A4,△A測定管=A4-A3。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
計算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
DHA(nmol/mg prot) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(Cpr×V樣)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計算
DHA(nmol/104 cell) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計算
DHA(nmol/mL) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷V樣
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)液:100μmol/L;V樣總:上清液總體積,1.0 mL=1 ×10-3 L;V標(biāo)準(zhǔn):加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g)。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
DHA(nmol/mg prot) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(Cpr×V樣)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
DHA(nmol/g 鮮重) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷W
(3). 按細(xì)胞數(shù)量計算
DHA(nmol/104 cell) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷(W×V樣÷V樣總)
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計算
DHA(nmol/mL) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)]÷V樣
=100×△A測定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)液:100μmol/L;V樣總:上清液總體積,1.0 mL=1×10-3 L;V標(biāo)準(zhǔn):加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g)。
注意事項:
1.臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存,3天內(nèi)使用完。
2.最低檢出限為10μmol/L。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測,標(biāo)本對環(huán)境溫度高,可聯(lián)系客服安排專人取樣(限省內(nèi)客戶)。
6、代測免收代測費,一周出結(jié)果。
7、產(chǎn)品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收,做退回。我們將在24小時之內(nèi)為您補發(fā) 損壞產(chǎn)品。
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