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公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應各大科研單位和學校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應商。公司嚴把質(zhì)量關(guān)，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63383 |
MDH （EC
測定原理：
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一、提取液100 mL×1瓶，在4℃保存；
試劑二、液體20 mL×1瓶，在4℃保存；
試劑三、粉劑×1瓶，-20℃保存；
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入19mL試劑二和0.5mL蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
3、測定前將檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL樣本和195μL工作液，混勻后立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
NADP-MDH活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADP-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NADP-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=12.86×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.005 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）NADP-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=12860×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NADP-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =12860×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
NADP-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=25.72×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.005 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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