13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
13585831301021-59541103 021-604432113004967995
在線訂購 免費(fèi)訂購熱線：021-59541103 021-60443211
標(biāo)簽:中性蛋白酶（Neutral protease NP）活性測定試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
電話:021-59541103 021-60443211
手機(jī):13585831301
Q Q： 3004967995
Email:3004967995@qq.com
詳細(xì)地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 中性蛋白酶（Neutral protease, NP）活性測定試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01Ｓ63575 |
測定原理：
中性條件下，NP催化酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在680nm有特征吸收峰。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入10mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發(fā)，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用）。
試劑四：粉劑×1瓶， 4℃保存。臨用前加20mL蒸餾水溶解。
試劑五：液體4mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：
1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
2.血清或培養(yǎng)液：直接測定。
3.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到680 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。
3. 對照管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入40μL試劑三，混勻后8000g，4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，記為A對照管。
4. 測定管：取0.5 mL EP管，加入20μL粗酶液，40μL試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入40μL試劑二，混勻后8000g， 4℃離心10min；取40μL上清液，加入新的EP管，再加入200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，記為A測定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）
5. 空白管：取0.5 mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，記為A空白管。
6. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5 mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)品，200μL試劑四，40μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。
計算公式：
1. 按照樣本蛋白濃度計算
NP活性單位定義：30℃每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
NP活性單位定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /g鮮重）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W
3. 按照液體體積計算
NP活性單位定義：30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min/mL）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
4.按照細(xì)胞數(shù)量計算
NP活性單位定義：30℃每104個細(xì)胞每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /104 cell）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品：0.25 μ mol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液；V反總：酶促反應(yīng)總體積，0.1mL；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），0.02 mL；V2：提取液總體積（mL），1mL；T：催化反應(yīng)時間（min），10min；W：樣品質(zhì)量（g）。
注意事項：
臨用前配制的試劑配制好后4℃保存，并且3天內(nèi)使用完畢。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
留言注意事項：
1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。
2.請您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。
| 您感興趣的產(chǎn)品* | |
| 您的單位* | |
| 聯(lián)系人* | |
| 聯(lián)系電話* | |
| 詳細(xì)地址* | |
| 常用郵箱* | |
| 請輸入您對我們的意見或建議* | |
| 驗(yàn)證碼* | |
 |
產(chǎn)品訂購說明:
1、報價含普票、運(yùn)費(fèi)。
2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測，標(biāo)本對環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。
6、代測免收代測費(fèi)，一周出結(jié)果。
7、產(chǎn)品因運(yùn)輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內(nèi)為您補(bǔ)發(fā) 損壞產(chǎn)品。
8、如因單位財務(wù)制度原因，可申請先發(fā)貨，報賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學(xué)校信譽(yù)良好客戶）。
普票匯款信息
賬 戶 名：上海生物
開 戶 行：中國銀行山東省分行營業(yè)部
賬 號：2169 2341 6278
關(guān)于莼試
產(chǎn)品訂購
新手指南
幫助中心