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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應各大科研單位和學校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應商。公司嚴把質量關,確保每一個出廠產(chǎn)品質量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63573 |
氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒質量可靠、價格優(yōu)惠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。
測定原理:
氨基酸的α -氨基可與水合茚三酮反應,產(chǎn)生藍紫色化合物,在570 nm有特征吸收峰;通過測定570 nm吸光度,來計算氨基酸含量。
自備儀器及用品:
臺式離心機、水浴鍋、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽、無水乙醇、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。
試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。
標準品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標準液,4℃避光保存。
樣品中AA提?。?/span>
1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。
2.細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3.血清等液體:直接檢測。
測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節(jié)波長到570 nm,蒸餾水調零。
2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A空白管。顯色后務必在30min內(nèi)測完。
3. 標準管:取EP管,加入10μL標準品,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A標準管。顯色后務必在30min內(nèi)測完。
4. 測定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A測定管。顯色后務必在30min內(nèi)測完。
注意:空白管和標準管只需要測定一次。
氨基酸含量計算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
氨基酸含量(μmol /mg prot)= [C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)]÷(V樣×Cpr)
=1×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷Cpr
(2)按樣本質量計算
氨基酸含量(μmol /g 鮮重)=[C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)] ÷(V樣總÷V樣)÷W
=1×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C標準品×V標準品×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)] ×(V樣總÷V樣×細胞數(shù)量)
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管) ÷細胞數(shù)量
(4)按照液體體積計算
氨基酸含量(μmol /mL)=[C標準品×V標準品×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]÷V樣
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
C標準品:標準品濃度,1 μmol/mL;V標準品:反應體系中加入標準品體積,0.01 mL;W:樣品質量,g;V樣:反應體系中加入樣品提取液體積,0.01 mL;V樣總:樣品提取液總體積,1mL;;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
氨基酸含量(μmol /mg prot)=[C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)] ÷(V樣×Cpr)
=1×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷Cpr
(2)按樣本質量計算
氨基酸含量(μmol /g 鮮重)=[C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)]×(V樣總÷V樣)÷W
=1×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
氨基酸含量(μmol /104 cell)= [C標準品×V標準品×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)] ×(V樣總÷V樣×細胞數(shù)量)
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管) ÷細胞數(shù)量
(4)按照液體體積計算
氨基酸含量(μmol /mL)=[C標準品×V標準品×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]÷V樣
=1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
C標準品:標準品濃度,1 μmol/mL;V標準品:反應體系中加入標準品體積,0.01 mL;W:樣品質量,g;V樣:反應體系中加入樣品提取液體積,0.01mL;V樣總:樣品提取液總體積,1mL;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL。
注意事項:
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。
4.最低檢出限為100μmol/L。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴格的產(chǎn)品當天可發(fā)貨。
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