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PCR MasterMix(含綠色染料)

  • 產品貨號：CS-01F97522
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：341
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20μL×100T|20μL×400T|20μL×2000T|20μL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：PCR MasterMix(含綠色染料)現貨供應，價格實惠。

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標簽:PCR MasterMix(含綠色染料) 20μL×100T 20μL×400T 20μL×2000T 

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規(guī)格

貨號

PCR MasterMix(含綠色染料)

2×LoadEasy PCR MasterMix(Green)

20μL×100T|20μL×400T|20μL×2000T|20μL

CS-01F97522

介紹

 本產品是一種使用特別便捷的含有藍色和橙色染料(電泳位置分別約4kb和50bp)的2倍濃度的PCR預混液，含有2×Taq DNA Polymerase、2×PCR Buffer、2×dNTP和2×Loading Buffer，只需加入模板DNA、引物和水即可進行PCR擴增，并且擴增完畢后可以直接上樣電泳。主要適用于cDNA或基因組DNA等的常規(guī)PCR擴增，特別適合于定性或半定量的PCR擴增，也可用于長度小于2kb的DNA片段的擴增和克隆。

2×LoadEasy PCR MasterMix(Green)中已經含有所有的通用組分，用戶只需自備引物、模板DNA和水即可進行PCR擴增。大大簡化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過程中可能導致的污染，使PCR的重復性更好。

2×LoadEasy PCR MasterMix(Green)可以擴增出長達8kb的片段，但通常更適合用于擴增2kb以下的DNA片段。

本產品中加入了藍色和橙色的電泳示蹤染料(整體呈現綠色)，其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于4kb和50bp處。PCR結束后可直接進行電泳檢測，無需再添加上樣緩沖液。藍色和橙色示蹤染料不會影響對相應DNA條帶的觀察和檢測。
保存：-20℃，至少一年有效。適當避免反復凍融。如需頻繁使用，可取適量存放于4℃，至少3天內有效。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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