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M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶

  • 產(chǎn)品貨號(hào)：CS-01F97385
  • 產(chǎn)品價(jià)格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國(guó)產(chǎn)
  • 包裝類(lèi)型:盒裝
  • 采購(gòu)熱度：277
  • 庫(kù)存：100
  • CAS號(hào)：
  • 方法：
  • 含量：2kU|10kU
  • 品牌名稱(chēng):莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡(jiǎn)介內(nèi)容：M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶現(xiàn)貨供應(yīng)，價(jià)格實(shí)惠。

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標(biāo)簽:M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶 2kU 10kU 

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產(chǎn)品屬性： 

產(chǎn)品名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶

M-MuLV Reverse Transcriptase

2kU|10kU

CS-01F97385

儲(chǔ)存條件：冷凍（-20℃）

概述

M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）是重組M-MuLV RT。它與M-MuLV RT的結(jié)構(gòu)和催化性能不同。該酶具有RNA-依賴(lài)性和DNA-依賴(lài)性聚合酶活性以及特異于RNA-DNA雜交體中RNA的RNA酶H活性，其顯著低于禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H Minus的活性并且在廣泛的溫度（42?55℃）范圍內(nèi)起作用。

特點(diǎn)

高效合成全長(zhǎng)鏈cDNA至13 kb，在42℃時(shí)的佳活性高達(dá)50℃的活性加入修飾的核苷酸

應(yīng)用

First strand cDNA synthesis for RT-PCR and real-time RT-PCR Synthesis of cDNA for cloning and expression Generation of labeled cDNA probes for microarrays DNA labeling Analysis of RNA by primer extension

儲(chǔ)存條件：冷凍（-20℃）

概述

M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）是重組M-MuLV RT。它與M-MuLV RT的結(jié)構(gòu)和催化性能不同。該酶具有RNA-依賴(lài)性和DNA-依賴(lài)性聚合酶活性以及特異于RNA-DNA雜交體中RNA的RNA酶H活性，其顯著低于禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H Minus的活性并且在廣泛的溫度（42?55℃）范圍內(nèi)起作用。

特點(diǎn)

高效合成全長(zhǎng)鏈cDNA至13 kb，在42℃時(shí)的佳活性高達(dá)50℃的活性加入修飾的核苷酸

應(yīng)用

First strand cDNA synthesis for RT-PCR and real-time RT-PCR Synthesis of cDNA for cloning and expression Generation of labeled cDNA probes for microarrays DNA labeling Analysis of RNA by primer extension

儲(chǔ)存條件：冷凍（-20℃）

概述

具有3’→5’的外切酶活性，能糾正DNA擴(kuò)增（PCR）過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤，而傳統(tǒng)的Taq DNA聚合酶等都不具有這種功能。其他高溫DNA Polymerase如：Vent，DeepVent，Tli，UlTma等也具有校正功能，但是Pfu是目前已發(fā)現(xiàn)的所有DNA聚合酶中擴(kuò)增DNA時(shí)出錯(cuò)率低的。Pfu DNA聚合酶比普通的Taq DNA聚合酶熱穩(wěn)定性更好，95℃，1小時(shí)仍保持90%以上的活力。

特點(diǎn)

8倍于Taq DNA聚合酶的準(zhǔn)確度；高度熱穩(wěn)定性：95℃孵育2小時(shí)后仍保持95%活性，產(chǎn)生平端PCR產(chǎn)物結(jié)合修飾的核苷酸（如，，熒光標(biāo)記的核苷酸）

應(yīng)用
高保真PCR，產(chǎn)生用于克隆和表達(dá)RT-PCR的PCR產(chǎn)物，用于cDNA克隆和表達(dá)，Blunt-end PCR克隆
實(shí)驗(yàn)步驟：
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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