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通用型動物組織PCR試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F97194
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：212
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50T|200T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：通用型動物組織PCR試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:通用型動物組織PCR試劑盒 50T 200T 

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通用型動物組織PCR試劑盒

Animal Tissue Direct PCR Kit

50T|200T

CS-01F97194

該試劑盒可用于轉基因型鑒定、動物基因分型等多種大規(guī)?；驒z測。動物組織直接PCR試劑盒是一種可直接對不同動物組織進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣、穩(wěn)定性。試劑盒中采用獨特的裂解緩沖液體系，可以簡便快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組DNA。整個過程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代謝物，也無需有機溶劑抽提，即可得到質量穩(wěn)定的基因組DNA，無需后續(xù)純化步驟即可直接用于PCR反應。而且樣品需求量小，少到5mg動物組織即可進行實驗。

 

試劑盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合物，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，并以dUTP替代了dTTP，另外加入了能夠降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應前，利用UNG酶降解含有的PCR產物，UNG 酶對不含有的模板不會造成任何影響，從而保證擴增的特異性和準確性，防止了大規(guī)?；驒z測時可能出現的PCR產物污染問題。優(yōu)化的2×Tissue Master Mix與直接裂解液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測，并具有靈敏度高、兼容性、特異性、穩(wěn)定性好等特點。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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