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通用型全基因組擴增試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F97040
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：228
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：25次
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：通用型全基因組擴增試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，價格實惠。

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標(biāo)簽:通用型全基因組擴增試劑盒 25次 

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產(chǎn)品屬性： 

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

通用型全基因組擴增試劑盒

Universal Whole Genome Amplification Kit；

25次

CS-01F97040

本產(chǎn)品是用于基因組DNA擴增全基因組的試劑盒，可以方便、簡單、快速、經(jīng)濟的得到穩(wěn)定產(chǎn)量的基因組DNA擴增樣品。

產(chǎn)品特點：

基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和鏈取代能力。

可以擴增基因組達上萬倍，具有高產(chǎn)量和高保真性的特點。

可使用各種來源的樣品，包括全血，干血，發(fā)根，口腔粘膜刮液培養(yǎng)細胞，真菌和病毒等。

操作簡便快捷，恒溫（30℃）反應(yīng)，無須PCR儀即可實現(xiàn)擴增。

產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗，包括多重PCR、長片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫構(gòu)建、單倍型分析、測序、基因芯片分析、各種遺傳分析（片段差異，微衛(wèi)星差異，SNP，STR）等。

本產(chǎn)品適用于純化好的基因組DNA。

本產(chǎn)品只能用于科研。

保存：-20℃，有效期1年。

產(chǎn)品組成：

組分 規(guī)格

WGA溶液A 250μL

2×WGA溶液B 300μL

phi29 DNA聚合酶(10U/μL) 25μL

本產(chǎn)品是高效cDNA合成和PCR擴增的一步法RT-PCR試劑盒，用于以RNA為模板，通過特異引物合成cDNA之后，在DNA聚合酶的作用下通過PCR技術(shù)檢測目標(biāo)基因的含量。

產(chǎn)品特點：

實現(xiàn)一管式完成RT-PCR反應(yīng)，避免樣品交叉污染。

反應(yīng)產(chǎn)物加入Loading Buffer后可以直接電泳檢測。

本產(chǎn)品包含了cDNA合成以及PCR反應(yīng)所必須的酶和反應(yīng)體系，優(yōu)化的Buffer體系大程度的減少了反轉(zhuǎn)錄酶對擴增反應(yīng)的抑制，提高了反應(yīng)整體的敏感性。

本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的RT-PCR，只能用于科研目的。
保存：-20℃保存，有效期一年。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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