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7-AAD細胞活力染色液

  • 產品貨號：CS-01F96998
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：150T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：7-AAD細胞活力染色液現貨供應，價格實惠。

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標簽:7-AAD細胞活力染色液 150T 

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7-AAD細胞活力染色液

7-AAD Viability Staining Solution

150T

CS-01F96998

本品為7-AAD的即用型染色液，可直接用于細胞染色，其大激發(fā)波長為546nm，大發(fā)射波長為647nm，可在流式細胞儀下(FL3通道)檢測熒光度。若每次（含1×105個細胞）用量10μl，本品可供檢測150次。

7-Aminoactinomycin D，簡稱7-AAD，是一種核酸染料，與DNA結合后可發(fā)出烈的熒光，其熒光特性與PI相似，可被488nm氬離子激光激發(fā)，但其發(fā)射光譜較PI窄，且發(fā)射波長更長，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的佳替代品，可與多種488激發(fā)光激發(fā)的熒光染料聯(lián)合使用，如FITC，PE等。

另外，7-AAD是一種非滲透性熒光染料。該染料不能透過活細胞的細胞膜，但可穿透膜損傷細胞如晚期凋亡細胞或者壞死細胞的細胞膜并與其內的DNA結合，可用來區(qū)分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞，廣泛用于流式細胞術檢測。

注意事項

1）7-AAD為潛在致癌物質，操作時請穿戴手套、眼罩以及其他防護措施，以避免接觸皮膚。

2）玻璃器皿上殘留的去垢劑也會影響染色的效果，導致細胞存在或不存在都會出現熒光。玻璃器皿的清洗應用去垢劑，然后用自來水沖洗數遍后，用去離子水或蒸餾水漂洗。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注】：7-AAD染色一般在其它染色完成后再進行，且僅僅染色死細胞。

樣品在完成其他染色后，取0.5ml細胞懸液（～1×105個細胞），加入約10μl 7-AAD細胞活力染色劑，根據其激發(fā)發(fā)射波長（Ex/Em=545nm/650nm）在流式細胞儀下(FL3通道)檢測熒光度。
儲存條件：4℃避光干燥
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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