產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
細(xì)胞可滲透鈣離子熒光探針	Indo-1, AM,Cell Permeable	50μg\|5×50μg\|1mg	CS-01F97032

Indo-1是一種細(xì)胞生物學(xué)常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結(jié)合Ca2+，同時(shí)可發(fā)出熒光，結(jié)合Ca2+后的大發(fā)射波長從結(jié)合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時(shí)）偏移，該信號變化可被流式細(xì)胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長激發(fā)該探針，在400nm和475nm的波長處分別檢測結(jié)合鈣離子和未結(jié)合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，為此在其負(fù)性基團(tuán)上結(jié)合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負(fù)電荷，極大的提高了細(xì)胞滲透性。在細(xì)胞內(nèi)，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結(jié)合。

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

儲存條件：-20℃，有效期6個月

Indo-1是一種細(xì)胞生物學(xué)常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結(jié)合Ca2+，同時(shí)可發(fā)出熒光，結(jié)合Ca2+后的大發(fā)射波長從結(jié)合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時(shí)）偏移，該信號變化可被流式細(xì)胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長激發(fā)該探針，在400nm和475nm的波長處分別檢測結(jié)合鈣離子和未結(jié)合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，為此在其負(fù)性基團(tuán)上結(jié)合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負(fù)電荷，極大的提高了細(xì)胞滲透性。在細(xì)胞內(nèi)，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結(jié)合。

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

儲存條件：-20℃，有效期6個月

糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，高碘酸-雪夫技術(shù)是McManus在1946年先使用的，常用來顯示糖原和其他多糖，而且還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)。阿利新藍(lán)和PAS技術(shù)聯(lián)合使用可鑒別同一組織切片中的中性粘液和酸性粘液。

阿利新藍(lán)（又稱阿爾辛藍(lán)、愛先藍(lán)），是類銅鈦花青染料，這種陽離子染料與酸性基團(tuán)結(jié)合，即阿利新藍(lán)與組織內(nèi)含有的陰離子基團(tuán)如羧基和硫酸根形成不溶性復(fù)合物，可將唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成藍(lán)色。PAS技術(shù)可將中性粘液染成紅色，由于阿利新藍(lán)與雪夫試劑結(jié)合并發(fā)生反應(yīng)，又將既含中性粘液又含酸性粘液的組織和細(xì)胞染成深淺不同的紫色。終，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中酸性粘液物質(zhì)呈藍(lán)色，中性粘液物質(zhì)呈紅色，混合粘液物質(zhì)呈紫紅色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。

產(chǎn)品組份：

阿利新藍(lán)染液（藍(lán)色液體）————20 ml

高碘酸溶液（無色液體）—————20 ml

雪夫試劑（淡紅色液體）—————20 ml

蘇木素（紫紅色液體）——————20 ml

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）試劑盒臨用前前半小時(shí)取出恢復(fù)室溫，用后應(yīng)放回冰箱保存。

3）雪夫試劑染色時(shí)間不宜過長，一般組織變色后即可。

4）蘇木素復(fù)染細(xì)胞核時(shí)應(yīng)淡染，這樣與阿利新藍(lán)容易區(qū)別，也可以選擇不染。
儲存條件：室溫，有效期36個月

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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