產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
快速姬姆薩染液(適用于血涂片、骨髓涂片染色)	Fast Giemsa Stain	250ml1,500ml1	CS-01F96995

姬姆薩染色（Giemsa stain）是一種標準化的組織學(xué)染色方法，通過對染色體染色的原理形態(tài)學(xué)上區(qū)分不同的細胞類型如血小板，紅細胞，白細胞和其他細胞。吉姆薩染色液是由亞甲基藍（methylene blue,），曙紅（eosin）和天青B（Azure B）組成的混合液，主要用于血液，骨髓涂片，石蠟切片和其他臨床細胞學(xué)標本。

產(chǎn)品組份：

試劑1————250ml

試劑2————500ml

操作步驟

1. 平置血涂片于染色架上，滴加試劑一3～5滴，使其迅速蓋滿血膜，染色1～2分鐘，以固定血片。

2. 不要倒掉試劑一，直接滴加試劑二6～10滴，輕搖玻片或用洗耳球?qū)恃科禋馐谷疽撼浞只旌?，染?/span>5～8分鐘。

3. 水洗30秒，待干后鏡檢。

染色結(jié)果

1. 紅細胞呈淺紅色，中央稍淡而略有蝶形態(tài)。

2. 白細胞系統(tǒng)清晰易分，細胞膜清晰呈紫黑色，細胞核著色呈深淺不同的紫紅色，胞漿淺紅色。胞漿中各種顆粒區(qū)分明顯。其中1）中性粒細胞胞漿中顆粒呈淡紫紅色、嗜酸粒細胞胞漿中顆粒呈桔紅色、嗜堿性粒細胞胞漿中顆粒呈藍褐色。Ⅱ）單核細胞的胞漿呈灰藍色，胞漿中顆粒呈細小淡紫紅色或藍紫色。Ⅲ）淋巴細胞胞漿呈淡藍色。

注意事項

1. 推片：取全血3微升左右置載玻片上，將推玻片保持與載玻片30度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見血液沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動，至血液鋪完血膜為止。

2. 涂片時不要太厚也不要太薄。太厚紅細胞重疊并易皺，太薄時不易找到白細胞。

3. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否則染色時血膜易脫落。

4. 試劑一及二染液不能過少，以防很快蒸發(fā)引起染液沉淀。試劑一不可少于400微升，試劑二是試劑一的2倍量。滴加試劑一及二時要輕搖玻片或用洗耳球?qū)恃禋?，使染液充分混合?/span>

5. 鏡檢時如果紅細胞偏藍，請放在蒸餾水中1~3分鐘，直至紅潤為止。

6. 染色過淡，可復(fù)染。染色過深，可用水沖洗或浸泡，還可用75%乙醇脫色3～5秒。
儲存條件：室溫，有效期12個月。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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