產(chǎn)品目錄

本制品是一種靈敏、穩(wěn)定和相對安全的熒光核酸染色試劑。它可以替代高毒性染色劑－溴化乙錠(EB)，用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中雙鏈DNA和單鏈DNA的染色。BalbGelRed的靈敏度遠(yuǎn)高于EB，并且不需要脫色。由于BalbGelRed和EB有相同的光譜特性，因此用它替代EB時不需要更換成像系統(tǒng)。

BalbGelRed既可用于預(yù)制凝膠也可用于電泳后染色。通常電泳后染色的靈敏度更高，并能排除染料對DNA遷移的干擾。使用BalbGelRed進(jìn)行電泳后染色，操作簡單不需要脫色和特殊溶液。只要將染料稀釋在0.1M NaCl中，并將凝膠置于染色液中，30分鐘后就可以觀察。染色液在室溫下極為穩(wěn)定，可以多次反復(fù)使用。相比而言，預(yù)制凝膠由于不需要額外染色過程，因此染料用量更少，更為簡單經(jīng)濟(jì)。

除了無與倫比的靈敏度和穩(wěn)定性外，獨立實驗室的毒性測試也顯示，在凝膠染色的濃度下，BalbGelRed沒有誘變性和細(xì)胞毒性。BalbGelRed安全性的關(guān)鍵在于它對于細(xì)胞膜完全沒有通透性。

產(chǎn)品特點：

1．無毒性：BalbGelRed獨特的油性和大分子量特點使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，艾姆斯氏試驗結(jié)果也表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。

2．靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

3．穩(wěn)定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性。

4．信噪比高：樣品熒光信號，背景信號低。

5．操作簡單：與EB一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解;而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
6．適用范圍廣：可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法);適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳;可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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