產(chǎn)品目錄

NadRed紅色核酸染料是一種EB (溴化乙錠)的升級(jí)換代產(chǎn)品，用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色。NadRed具有安全(致突變性極低且檢測(cè)不到顯著的細(xì)胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，凝膠中的核酸在使用本產(chǎn)品染色后用適當(dāng)紫外燈(300nm左右波長(zhǎng))檢測(cè)呈現(xiàn)紅色熒光，適用于原先使用EB為染料的凝膠成像系統(tǒng)。

NadRed比EB和SYBR Green更安全。NadRed在遠(yuǎn)高于其工作濃度范圍時(shí)均沒(méi)有細(xì)胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(yàn)(Ames test)結(jié)果表明，NadRed的誘變性遠(yuǎn)小于EB。EB在多種致突變測(cè)試中呈現(xiàn)很的誘變性，而NadRed僅僅在濃度高達(dá)20微克/毫升時(shí)，并在S9代謝活化時(shí)有非常微弱的誘變性。通常NadRed在凝膠中的工作濃度約為2微克/毫升，大大低于可導(dǎo)致誘變的濃度。NadRed和的另外一種安全型核酸染料NadGreen，由于它們特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以進(jìn)入細(xì)胞，從而大大降低甚至避免了染料的致突變性和細(xì)胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入活細(xì)胞并染色DNA，并且有報(bào)道SYBR Green可以烈增紫外線誘導(dǎo)的基因突變。

NadRed的使用方法和EB一致。NadRed可以按適當(dāng)比例直接加入瓊脂糖中配制成凝膠，也可以在電泳完畢后對(duì)凝膠進(jìn)行染色。前者更加方便，而后者靈敏度要更高一些。但由于NadRed本身已經(jīng)非常靈敏，通常采用把NadRed直接配制在凝膠中就可以了。對(duì)于一些特殊情況，如核酸樣品量特別少的情況等，則可以考慮電泳后再對(duì)凝膠進(jìn)行染色。

本制品可室溫保存，至少兩年有效。

NadRed對(duì)于核酸的遷移率影響非常小，小于SYBR Green對(duì)于核酸遷移率的影響。

通過(guò)凝膠回收試劑盒或酚氯仿抽提，可以有效去除與DNA或RNA結(jié)合的NadRed，從而確保不會(huì)影響后續(xù)的連接、酶切、PCR、測(cè)序等常規(guī)的分子生物學(xué)用途。

注意事項(xiàng)：

制備好的NadRed瓊脂糖凝膠，在4℃避光條件下通?？梢员４?/span>3-5天。

NadRed瓊脂糖凝膠再次熔化使用時(shí)，為取得更好的觀察效果，需要添加適量NadRed。

電泳之后的凝膠不建議重復(fù)使用。

電泳后再使用NadRed染色的凝膠一般不需要脫色。如果發(fā)現(xiàn)背景太高，可以使用不含核酸酶的水進(jìn)行脫色處理。

NadRed和NadGreen除了可以染色雙鏈DNA外，也可染色單鏈DNA和RNA。NadRed對(duì)單鏈核酸的染色靈敏度約為對(duì)雙鏈DNA染色靈敏度的一半。NadRed對(duì)單鏈核酸的染色靈敏度約為NadGreen的5倍。

如果使用聚丙烯酰胺凝膠，請(qǐng)使用浸泡染色法染膠，并延長(zhǎng)染色時(shí)間至30分鐘-1小時(shí)。

如果觀察到條帶彌散或者分離不理想，建議使用浸泡染色法染色以確認(rèn)是否與染料有關(guān)。如果浸泡染色法染色后仍然出現(xiàn)類似的問(wèn)題，說(shuō)明與染料無(wú)關(guān)，請(qǐng)嘗試以下方法：使用新鮮配制的電泳緩沖液、降低核酸的上樣量、降低染料的濃度、降低瓊脂糖濃度、選用更長(zhǎng)的凝膠、降低電泳電壓一倍以上并延長(zhǎng)凝膠電泳時(shí)間以改善電泳效果、使用更薄的梳齒等。

本產(chǎn)品兼容常用的電泳緩沖液，例如TAE和TBE。
NadRed不屬于有毒有害物質(zhì)，并通過(guò)了環(huán)境安全相關(guān)測(cè)試，相關(guān)廢棄物無(wú)需特殊處理，可以參考常規(guī)化學(xué)試劑進(jìn)行處理。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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