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電泳級耐熱型SYBR染料

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F96721
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：228
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50μL
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：電泳級耐熱型SYBR染料現(xiàn)貨供應(yīng)，價格實惠。

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標簽:電泳級耐熱型SYBR染料 50μL 

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產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

電泳級耐熱型SYBR染料

SuperSYBR Green

50μL

CS-01F96721

本品是改良型的SYBR Green I，它跟常規(guī)的SYBR Green I相比檢測靈敏度相當(dāng)，但具有耐熱、耐水解的特點，所以十分穩(wěn)定，使用更加方便。

產(chǎn)品特點：

1. 穩(wěn)定，本產(chǎn)品濃縮液可以在常溫下存放一年以上，方便運輸和保存。本產(chǎn)品的1X工作液在常溫下的半衰期為120 多天，比常規(guī)的SYBR Green I(5天)長20倍以上。

2. 使用方便多樣，既可以在制備凝膠時加入到融化的瓊脂糖凝膠中，還可以象常規(guī)的SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR safe、GelStar一樣用于電泳后染色。

3. 靈敏，其檢測靈敏度跟SYBR Green I相同，比EB 靈敏200-100倍。

4.低毒、環(huán)保、健康。

5.可檢測各種核酸分子，包括dsDNA、ssDNA、RNA和Oligo。

6. 兼容性好，不但與常用的TAE、TBE和5分鐘快電泳緩沖液SuperBuffer-2等兼容，還與常用的UV 檢測系統(tǒng)和可見光激發(fā)檢測系統(tǒng)兼容。

7. 對 DNA 泳動速度的影響小于常規(guī)的SYBR Green I。

8. 半衰期長，自然損耗低，可多次使用，使其相對使用成本比常規(guī)的SYBR Green I和其它非對稱花青類染料低。

儲存條件：常溫運輸保存(避光)，保存期為一年。
本產(chǎn)品可以在電泳中染色，優(yōu)點是用量少，但如果與DNA的比例沒達到佳時，帶型容易彌散；也可以在電泳后染色，優(yōu)點是不會對DNA電泳產(chǎn)生干擾，但用量大，還需要額外的染色過程。客戶可以根據(jù)需要選擇使用方法。不建議將本產(chǎn)品用于染色后再上樣(即先將其與DNA 混合然后再上樣)，也不建議將其用于PAGE(因分子較大,難以進入凝膠)。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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