產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品為蛋白原液形式。每種裝于凍存管中，單抗質(zhì)量為標(biāo)示數(shù)量 5MG，體積根據(jù)其濃度不同略有不同。使用前可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行稀釋，溶劑建議用去離子無菌水(細(xì)胞培養(yǎng)用水)或者 PBS (細(xì)胞培養(yǎng)級)。不建議使用含有防腐成分的稀釋液進(jìn)行稀釋，會增加細(xì)胞或者動物毒性。稀釋前，計(jì)算加入多少體積溶劑，請參考購買蛋白濃度，或者詢問我司，

舉例，單抗蛋白原液蛋白濃度為 50mg/ml,對應(yīng) 5MG 包裝的蛋白原液體積為 5mg (質(zhì)量) /50mg/ml(濃度)=0.1ML，實(shí)驗(yàn)需求蛋白濃度為 10mg/ml, 需要稀釋倍數(shù)為 50/10=5, 則需要加入 0.4ML,即 400ul PBS 或者無菌去離子水即可。若給藥量為固定質(zhì)量值，比如單次給藥 0.5MG，對應(yīng)蛋白原液給藥體積為 10ul，建議稀釋后，提高給藥體積降低誤差，因?yàn)樽⑸淦骰蛘咭埔浩魑^殘留會影響實(shí)驗(yàn)效果。稀釋后的蛋白溶液，可于 2-8 度冷藏避光保存不超過 2 周，不建議長期儲存。

避免反復(fù)凍融，每次凍融蛋白活性會降低約 5%左右

生物活性 (僅來自于公開文獻(xiàn)，不保證其有效性)

描述	Cetuximab (anti-EGFR)是一種新型的分子靶向藥物，是 EGFR 的抑制劑，同時也是人源 EGFR 單克隆抗體，與 EGFR 的胞外結(jié)合區(qū)域相互作用并抑制其受配體刺激。
靶點(diǎn)	EGFR (Cell-free assay) ：0.39 nM(Kd)
體外	Cetuximab (anti-EGFR)是一種重組嵌合的單克隆抗體，與人類 EGFR 受體具有高度親和力。它與 EGFR 結(jié)合、抑制其受體相關(guān)的激酶的磷酸化合激活，從而導(dǎo)致細(xì)胞生長受到抑制、誘導(dǎo) 細(xì)胞凋亡并減少 VEGF 的產(chǎn)生。Cetuximab 具有顯著的單藥抗腫瘤作用，在高表達(dá) EGFR 蛋白的 NPC 細(xì)胞系中與 cisplatin 或 paclitaxel 具有加成作用，但對低表達(dá) EGFR 的 NPC 細(xì)胞系 (如 CNE-2 和 C666- 1 )的作用甚微。 Cetuximab 阻止 EGFR 與配體的相互作用，抑制下游 RAS-ERK 激活。它能夠促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(ER stress) ，促使 ER 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜。它競爭性地抑制配體結(jié)合，抑制酪氨酸激酶激活，導(dǎo)致受體下調(diào)。除了競爭性抑制作用， cetuximab 與 EGFR 結(jié)合還可能引起受體內(nèi)在化和被破壞。
體內(nèi)	在小鼠移植瘤模型中， Cetuximab 能夠增強(qiáng)幾種化療藥物的抗腫瘤活性。它通過多種機(jī)制，包括抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展，將細(xì)胞周期阻滯在 G1 期、減少 S 期細(xì)胞數(shù)目來發(fā)揮其抗腫瘤作用。 Cetuximab 將細(xì)胞阻滯在 G1 期還能引起凋亡，通過誘導(dǎo)和激活相關(guān)促凋亡分子。單獨(dú)給藥或是與 carboplatin 協(xié)同給藥能夠引起腫瘤大小減少、轉(zhuǎn)移擴(kuò)散減少、減少細(xì)胞表面表達(dá) EGFR、無 BRAF 和 K-ras 突變的 NCI-N87 腫瘤中 MVD。而在源自于 MKN-45 的腫瘤中作用甚微(其腫瘤表型是 BRAF 和 K-ras 行盛行，但胞質(zhì)內(nèi) EGFR 弱表達(dá))。

經(jīng)典實(shí)驗(yàn)操作(僅來自于文獻(xiàn)，供參考)

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

Objective: 細(xì)胞活力檢測

Cells: HNE1 和 CNE2 細(xì)胞

Concentrations: 62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/ml

Incubation Time: 48 h

Method: 將細(xì)胞以 5 × 103 個細(xì)胞/孔的密度培養(yǎng)與平底 96 孔板。在 37℃、 5% CO2 的條件下孵育 24 小時后，將 200 μL 用培養(yǎng)基稀釋成不同濃度的 cetuximab (62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/mL)和/或 cisplatin (0.25, 0.5, 1, 2, 4 或 8 µg/mL)加入每孔。處理 48 小時后，向每孔加入 10 μL CCK-8。孵育 2 小時后，通過檢測 450 nm 處的吸收光值檢測細(xì)胞活力。

Objective: To analyze the apoptosis of CRC cells

Cells: human DiFi CRC (Colorectal Cancer) cells

Concentrations: 10 pg/ml

Incubation Time: 72h

Method: To analyze the apoptosis, cells were seeded into 6-well plates (3 × 105 cells per well). After 24 h, cells were cultured both in the absence and presence of drugs. Cell death and apoptosis were assessed by cytofluorimetric analysis using PE-annexin V and 7-aminoactinomycin D (7-AAD) according to the manufacturer's instructions at different time points.

動物實(shí)驗(yàn)

Objective: Cetuximab 在小鼠胃癌模型中的抗腫瘤活性

Animal Models: 人類胃癌的裸鼠模型( CD-1/nu-nu mice )

Formulation: 0.9% NaCl

Dosages: 1 mg/kg

Administration: i.p.

Objective: To investigate the relationship between the EGFR levels and the responsiveness to cetuximab treatment in human cancer xenograft models

Animal Models: Female athymic, nude mice were implanted s.c. with ~1 mm3 tumor fragments

Formulation: PBS

Dosages: 0.25, 0.5 or 1 mg/mouse

Administration: i.p.

注：本產(chǎn)品僅供科研使用！

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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