產(chǎn)品目錄

本PAGE預制膠是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝膠，能滿足客戶上樣量大的需求。其獨特的膠板設(shè)計可以提高條帶分辨率，改善樣品在上樣孔里的分布狀態(tài)，使得條帶更加均勻。該預制膠采用獨特的凝膠緩沖系統(tǒng)，比常規(guī)的Tris-Glycine系統(tǒng)具有更強的緩沖能力，在pH中性條件下灌注，能夠更好地減少聚丙烯酰胺的降解，提高凝膠穩(wěn)定性。本PAGE預制膠不含有SDS，依賴于采用合適的電泳緩沖液和相應試劑，是SDS-PAGE和非變性凝膠電泳的理想材料。依賴特有的灌注技術(shù)可以保證預制膠批次間穩(wěn)定性和條帶分布一致性。本PAGE預制膠兼容實驗室最為常用的Tris-Glycine電泳緩沖液，而不必使用昂貴的Tris-MOPS或Tris-MES電泳緩沖液，有效降低成本。獨特的凝膠配方，可以高電壓電泳，25-30分鐘完成電泳，能夠?qū)崿F(xiàn)高效、可靠地分離蛋白質(zhì)，便于后續(xù)染色或轉(zhuǎn)膜檢測。

本PAGE預制膠提供不同濃度的梯度膠和固定濃度膠。梯度膠的濃度包括4-20%、4-12%和8-16%；固定濃度膠包括8%、10%、12%和15%。每種濃度的預制膠有12個點樣孔。膠板尺寸：長×寬×高為100 × 80 ×50 mm；凝膠尺寸：長×寬×厚為80×70×1 mm。

產(chǎn)品特點：

1、適用范圍廣：配合不同電泳緩沖液，能進行變性和非變性電泳適合大多數(shù)小型電泳槽

2、高分辨率：蛋白條帶分離更為清晰和均一

3、超快電泳：可以260-300V高電壓電泳，25-30分鐘結(jié)束電泳

4、超長保質(zhì)期：室溫可穩(wěn)定保存6個月，2-8℃可保存24個月

5、重復性高：不同批次預制膠的一致性好
6、物美價廉：兼容Tris-甘氨酸緩沖液，節(jié)約實驗成本

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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