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微量樣品核酸提取試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F99064
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：237
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：微量樣品核酸提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，價格實惠。

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標簽:微量樣品核酸提取試劑盒 50次 

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規(guī)格

貨號

微量樣品核酸提取試劑盒

Minute Amounts Of DNA-RNA Isolation Kit

50次

CS-01F99064

介紹

 

 本產(chǎn)品是是專門用于從各種微量和痕量樣品中提取DNA和RNA的試劑盒。

特點：

1. 核酸的回收率高，可以達到90%以上，可以跟QIAGEN的同類產(chǎn)品媲美。

2. 一管式操作，減少了樣品污染的可能。

3. 一站式套裝，除樣品外客戶不需要準備任何試劑，降低了實驗誤差。

4. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。

5. 可以處理各種形態(tài)的樣品，包括液體樣品，單個或少量的細胞，微小胚胎等等。

6. 與PCR、熒光PCR、RT-PCR、熒光RT-PCR 等后續(xù)反應(yīng)兼容。

7. 試劑穩(wěn)定，可以長期放置。

保存條件：常溫（溶液A超過6個月的存放需要4℃保存），有效期一年。溶液B和溶液C具有揮發(fā)性，使用后需要將瓶蓋擰緊。

使用方法：

1. 將不超過0.1mL的樣品轉(zhuǎn)移到自備的1.5mL 旋蓋塑料離心管中。

2. 加入0.3mL 溶液A，蓋上蓋子后振蕩3-5 秒。注意溶液A 是否有結(jié)晶沉淀（一般低溫放置就會產(chǎn)生沉淀），如果有則必須在用前37℃-65℃水浴，直到沉淀溶解并充分搖勻后方可使用。

3. 室溫靜置10分鐘。

4. 加入0.4mL 溶液B，蓋上蓋子后振蕩3-5 秒。

5. 15,000g室溫離心15分鐘。強烈建議在離心管管壁上用記號筆做簡單標記以區(qū)別離心面和向心面。

6. 小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀（此可見沉淀含有樣品中的核酸和助沉劑，所見部分主要是助沉劑。微量核酸沉淀本身太少，肉眼是看不見的）。

7. 加入1.0mL 溶液C，振蕩數(shù)秒后15,000 g 室溫離心5分鐘。注意：將離心管放入離心機時一定要將離心面向外。

8. 小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀。

9. 短暫離心數(shù)秒。注意：將離心管放入離心機時一定要離心面向外。

10. 小心移棄殘留上清（殘留的溶液C 會影響后續(xù)反應(yīng)）。此時管壁（離心面方向）上將有可見的膜狀沉淀。

11. 加入100 μL RNA 洗脫液，用移液槍仔細吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液如果混濁或有少量不溶物是正?，F(xiàn)象，不溶沉淀物中就裹含有核酸。
12. 直接取適量樣品用于PCR 或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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