產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
柱式中量血液基因組DNA提取試劑盒(1～5ml)	Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml)	50次	CS-01F99058

本試劑盒適用于從新鮮或冷凍全血(用檸檬酸鹽、EDTA或肝素等抗凝劑處理過的血液樣品)、血漿、血清、血沉棕黃層、骨髓、無細胞體液等樣本中提取總DNA，包括基因組DNA，線粒體DNA及病毒DNA。本品采用柱式提取方法，可以處理1-5ml的全血，可純化獲得大小為100bp到50kb的DNA，純化的DNA產(chǎn)量高、質(zhì)量好，最大限度去除蛋白、色素、脂類及其他抑制性雜質(zhì)污染，可直接用于PCR、熒光定量PCR、酶切和Southern Blot等實驗。

保存條件：Buffer RCL 2～8℃，其他組分室溫(15～30℃)

自備試劑：無水乙醇。

實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項：

1、向蛋白酶K 中加入5ml 蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。

2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。

3、本試劑盒最多可以提取1-5ml全血樣品，如需提取大量血液樣本請選用血液基因組非柱式提取試劑盒(#WE0176)。

4、第一次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽說明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇。

5、使用前請檢查Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請置于56℃水浴重新溶解。

6、如下游實驗對RNA污染較敏感，可加入4μl DNase Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0225S。

7、試劑盒中的Buffer RCL渾濁后不能繼續(xù)使用。

操作步驟：

1、向離心管(自備)中加入1-5ml血液樣品，加入3倍體積的Buffer RCL輕輕渦旋或顛倒混勻。

2、3000 rpm(～900×g)離心10分鐘，小心吸棄上清。

3、向沉淀中加入400μl Buffer GR，重懸沉淀。

注意：如果下游試驗對RNA敏感，可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液，震蕩15秒，室溫放置5分鐘。

4、1-2ml血液樣本提取時,向以上溶液中加入40μl 蛋白酶K ，混勻；2-5ml血液樣本提取時,向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混勻。

5、加入400μl Buffer GL，顛倒混勻15次，劇烈渦旋震蕩至少1分鐘。

注意：不要直接將蛋白酶K 直接加入到Buffer GL中。
6、70℃孵育10分鐘，其間顛倒混勻數(shù)次。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請您真實的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*