產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
小量全血基因組DNA提取試劑盒(0.3ml)	Whole blood genomic DNA extraction kit	50次×0.3ml\|200次×0.3ml	CS-01F99047

介紹

本試劑盒根據(jù)全血特點(diǎn)采用幾個(gè)快速步驟提取基因組DNA。首先紅細(xì)胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細(xì)胞，細(xì)胞核裂解液裂解白細(xì)胞釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過(guò)異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

試劑盒組份（200次）：

10×紅細(xì)胞裂解液——————20ml

細(xì)胞核裂解液————————60ml

蛋白沉淀液—————————20ml

DNA溶解液—————————20ml

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.從十幾個(gè)配方中優(yōu)選出的紅細(xì)胞裂解液配方，裂解快速完全。

2.不需要使用有毒的苯酚等試劑。

3.快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。

4.結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（典型的產(chǎn)量300µl全血可提取出4-15µg），OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)50Kb-150kb，可直接用于構(gòu)建文庫(kù)、PCR、Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

注意事項(xiàng)：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2. 用戶需自備異丙醇和70％乙醇。

3. 典型的產(chǎn)量300μl全血可提取出5-15μg 基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大）。

4. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的全血量（20μl-10ml），請(qǐng)聯(lián)系我們索取其它處理量的操作手冊(cè)。

5. 本試劑盒可運(yùn)用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細(xì)胞沉淀團(tuán)很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的

抗凝劑收集血液標(biāo)本。

6. 為了最佳效果，最好使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放小于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過(guò)3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

7. 對(duì)于每個(gè)樣品提取血量大或者用量大的客戶，可以和我們聯(lián)系，我們另外專門(mén)準(zhǔn)備有優(yōu)惠的大包裝試劑。

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期18個(gè)月。
本制品別名：少量全血DNA提取試劑盒|少量血液DNA提取試劑盒|小量全血DNA提取試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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