產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
E-64(蛋白酶抑制劑)	(L-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-Leucylagmatine Hemihydrate	1mg\|5mg\|10mg\|25mg\|50mg	CS-01F98974

介紹

E-64是一種不可逆的、效的、高選擇性半胱蛋白酶抑制劑。E-64不與非蛋白酶的功能性硫醇基團反應(yīng)，如L-乳酸脫氫酶或肌酸激酶。與亮抑酶肽和抗蛋白酶肽等其他半胱蛋白酶抑制劑不同，E-64不會抑制絲蛋白酶（除外）。E-64的反式環(huán)氧琥珀?；ɑ钚圆糠郑┎豢赡娴嘏c許多半胱蛋白酶的活性巰基結(jié)合，如木瓜蛋白酶、獼猴桃酶和組織蛋白酶B、H和L，從而形成硫醚鍵。E-64是一種非常有用的半胱蛋白酶抑制劑，具有特異性抑制作用，在細胞和組織中具有滲透性，毒性低。

E-64是親和純化半胱蛋白酶的有效配體。當與硫醇化親和基質(zhì)偶聯(lián)時，結(jié)合將成為可逆的，但保留了特異性。

E-64可溶于水?？膳渲瞥?/span>20mg/ml的水溶液（可能需要加熱）。建議儲備溶液是1mM水溶液。用作蛋白酶抑制劑的有效濃度為1至10μM。水溶液儲備溶液可在-20℃穩(wěn)定保存數(shù)月。稀釋液可在中性pH體系中穩(wěn)定保存數(shù)天。E-64在pH 2-10體系中穩(wěn)定，但在氨水或HCl體系中不穩(wěn)定。E-64也溶于DMSO，可使用無水DMSO制備10 mM溶液并儲存在-20℃。使用培養(yǎng)基進行后續(xù)稀釋。將E-64溶解在0.9％氯化鈉溶液中或溶解在少量的飽和溶液中并用0.9％氯化鈉稀釋（用乙酸調(diào)節(jié)pH至7.0），可制備注射液。

CAS號：66701-25-5

InChI Key：LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N

經(jīng)驗分子式：C15H27N5O5

分子量：357.41
保存條件：2-8℃

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請您真實的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*