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5ml Ni-IDA預(yù)裝重力柱

  • 產(chǎn)品貨號(hào)：CS-01F98919
  • 產(chǎn)品價(jià)格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國(guó)產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：250
  • 庫存：100
  • CAS號(hào)：
  • 方法：
  • 含量：1/PK|5/PK|10/PK
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡(jiǎn)介內(nèi)容：5ml Ni-IDA預(yù)裝重力柱現(xiàn)貨供應(yīng)，價(jià)格實(shí)惠。

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標(biāo)簽:5ml Ni-IDA預(yù)裝重力柱 1/PK 5/PK 10/PK 

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產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號(hào)

5ml Ni-IDA預(yù)裝重力柱

Ni-IDA 5 ml (Pre-Packed Gravity Column)

1/PK|5/PK|10/PK

CS-01F98919

概述

主要用于純化帶有組標(biāo)簽（6×His標(biāo)簽）的重組蛋白。本產(chǎn)品以進(jìn)口優(yōu)質(zhì)的6%交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，通過化學(xué)方法將亞氨基二乙酸（iminodicitic acid，IDA）分子固定于瓊脂糖表面羥基，再由IDA絡(luò)合金屬Ni2+而制成。純化原理是基于重組蛋白組標(biāo)簽的咪唑環(huán)可與過渡態(tài)金屬Ni2+離子形成穩(wěn)定的化學(xué)配位鍵，因此能特異、牢固、可逆地吸附于固定有這些金屬離子的瓊脂糖基質(zhì)。

儲(chǔ)存條件：冷藏（2-8℃）不可凍存

特點(diǎn)

與四價(jià)金屬離子螯合劑氮川三乙酸制成的Ni-NTA-瓊脂糖相比，Ni-IDA-瓊脂糖與目標(biāo)蛋白結(jié)合的能力更，柱容量更大；

在高濃度變性劑（8M尿素、6 M鹽酸胍）中性能穩(wěn)定，可直接用于包涵體蛋白的分離純化；

支持變性包涵體蛋白的柱上復(fù)性，起到分離、復(fù)性同步進(jìn)行的效果；

可以反復(fù)使用和再生3~5次。

組份　　1/5/10 PK
實(shí)驗(yàn)步驟：
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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