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蛋白marker（14.4～94kDa)

  • 產品貨號：CS-01F98680
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：248
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20次（200μl)
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：蛋白marker（14.4～94kDa)現(xiàn)貨供應，價格實惠。

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標簽:蛋白marker（14 4～94kDa) 20次（200μl) 

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蛋白marker（14.4～94kDa)

Protein Marker（14.4kDa～94kDa)

20次（200μl)

CS-01F98680

本制品是由7種蛋白質分別純化后混合而成的蛋白質溶液，分子量范圍為14.4-94.0kDa。經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳后用考馬斯亮藍R-250（Coomassie Brilliant Blue R-250)染色可得清晰的7條蛋白帶。本制品中每種蛋白約0.1-0.2μg/μl。

本制品為即用型產品，使用前請將蛋白質Marker置于室溫數(shù)分鐘，徹底溶解并輕彈混勻后，無需加熱，取10μl蛋白質Marker加入到凝膠（1mm厚mini-gel)孔內進行電泳；若加樣孔較大，可適當增加蛋白質Marker用量。使用方便，電泳圖像清晰。

保存條件：短期內多次使用置于4℃，-20℃保存一年。

使用方法：

取10μl本產品直接加入到SDS-聚丙烯酰胺凝膠的加樣孔中，進行電泳。建議使用分離膠濃度為12％，電壓120-200 V，電壓過低會導致小分子量的蛋白條帶彌散。

電泳條件：

凝膠濃度為12-15％ SDS-PAGE，Mini電泳裝置，建議電泳條件為：電壓120-200V，時間30-50min。

注意事項：

1．本產品可用考馬斯亮藍R-250 （Coomassie BrilliantBlue R-250)染色。
2．當Marker中有額外條帶出現(xiàn)時，需補加新配置的DTT至終濃度100mM。儲存緩沖液中DTT氧化易導致Marker中額外條帶的出現(xiàn)。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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