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產品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
一步法動物組織活性蛋白提取試劑盒	One Step Animal Tissue Active Protein Extraction Kit	20次	CS-01F98658

概述

一步法動物組織活性蛋白提取試劑盒用于從動物組織中提取有活性的總蛋白，該試劑由一種溫和的非離子型去污試劑、緩沖試劑和氯化鈉等組成。采用勻漿或聲破碎時，該試劑高效提取的蛋白質可以大限度地保持活性，可以用于1D和2D電泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、報告基因分析（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質激酶分析（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）、酶免分析（Western Blot、ELISA、RIA）、蛋白質純化等實驗，含有的去污試劑可通過透析去除。由抽提試劑、蛋白酶抑制劑混合物、DTT和PMSF組成。

儲存條件：按標簽提示分開儲存

特點

整個實驗過程只需要20min左右；

可以處理20×100mg的動物組織樣品；

提取的蛋白質可以透析去除離子和去污試劑，或將緩沖液替換為所需要的合適緩沖液；

提取的活性蛋白質保持非變性狀態(tài)，可以直接用于1D和2D電泳、Pull Down、EMSA、免疫共沉淀、蛋白純化、酶活分析等實驗；

可以維持報告基因酶（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質激酶（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）的活性。

應用

可以用于1D和2D電泳、免疫共沉淀、Pull Down、EMSA、報告基因分析、蛋白質激酶分析、酶免分析等生化分析。

組份

抽提試劑;蛋白酶抑制劑;DTT;PMSF

適用樣本
動物組織總蛋白提取

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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