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白濃縮柱是一種方便的蛋白濃縮脫鹽工具，只需要離心操作即可以用來對蛋白質(zhì)液體樣本進(jìn)行濃縮，還可以用于蛋白質(zhì)、抗原、抗體、酶和微生物的濃縮純化。也可以用來對蛋白質(zhì)樣品中的鹽分、糖類、核酸、非水溶劑及其他一些低分子量物質(zhì)進(jìn)行去除和緩沖液置換。還可以用來分離蛋白質(zhì)標(biāo)記時未結(jié)合上的游離標(biāo)記物。

蛋白濃縮柱使用蛋白質(zhì)低吸附性的再生纖維素過濾膜制造，具有快速、方便、回收率高的特點(diǎn)，可替代并優(yōu)于透析及蛋白沉淀法蛋白濃縮。

蛋白濃縮柱有多種規(guī)格可供選擇。

儲存條件：室溫避光保存。

用過的濃縮管要保持過濾膜濕潤，不能干掉。

注：濃縮柱配有2個微量離心管。

在操作過程中，一個可用于收集濾出液，而另一個用于回收濃縮后的樣本。

有效期：一年。

應(yīng)用場景：

1．對稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進(jìn)行濃縮；

2．組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化；

3．生物樣品濃縮：包括各種抗原、抗體、酶、核酸或微生物；

4．脫鹽和緩沖液更換。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1．高回收率 >90%；

2．垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化，加快離心速度，快達(dá) 5分鐘；

3．熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到低；

4．100% 完整性檢測確保性能可靠；

5．透明外殼和體積刻度方便樣品察看；

6．直接吸取樣品減少處理步驟；

7．高濃縮倍數(shù)：高達(dá)80–100倍

自備試劑耗材和儀器：
● 純水 ● 吸頭、離心管 ● 移液器 ●冰盒 ●離心機(jī)；可容納1.5ml微量離心管的固定角度轉(zhuǎn)子離心機(jī)?！癖?/span>

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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