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Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠

  • 產(chǎn)品貨號:CS-01F98177
  • 產(chǎn)品價(jià)格:電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地:國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度:188
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:
  • 含量:1mg
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內(nèi)容:Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠現(xiàn)貨供應(yīng),價(jià)格實(shí)惠。

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標(biāo)簽:Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠 1ml 

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產(chǎn)品屬性: 

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

Anti-His標(biāo)簽親和純化凝膠

Anti-His Affinity Gel

1ml

CS-01F98177

介紹

Anti-His Affinity GelAnit-His親和純化凝膠)由高質(zhì)量的鼠源 IgG1單克隆抗體與sepharose 4B gel 通過供價(jià)偶聯(lián)制備,本產(chǎn)品具有較高的His標(biāo)簽融合蛋白加載容量(至少為0.6mg protein/mL凝膠),雜蛋白非特異結(jié)合少,可用于帶有His標(biāo)簽的融合蛋白免疫沉淀(IP)和純化。我公司提供的Anit-His親和純化凝膠可用于純化N-端、C-端、4×His、5×His6×His融合蛋白。

亞型:Mouse IgG1

純化方法:Protein A

濃度:7.5g抗體/L凝膠

應(yīng)用:蛋白純化,免疫沉淀(IP

蛋白結(jié)合量(Protein):≥0.6 mg蛋白/mL凝膠

儲存緩沖液:TBS, 50% 甘油, pH 7.4,含有0.02%w/v)疊氮鈉
儲存條件:-20℃,有效期1

實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司

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