產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
DiI標(biāo)記人源乙?；兔芏戎鞍?/span>(紅色熒光)	Human Dil-Acetylated Low Density Lipoprotein(Human DiI-Ac-LDL)	500μg	CS-01F98172

本品為紅色熒光標(biāo)記的乙?；嗽吹兔芏戎鞍祝?/span>Human DiI-Ac-LDL），是標(biāo)記熒光探針DiI（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的Ac-LDL。當(dāng)DiI-Ac-LDL標(biāo)記細胞后，在溶酶體酶的作用下，脂蛋白被降解，而DiI在細胞內(nèi)膜聚集，從而可以用來檢測修飾型LDL的吸收情況。可以用來標(biāo)記血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞和內(nèi)皮祖細胞（EPC），可用來鑒定并分選這些細胞，以及用來研究不同細胞系對修飾化LDL的內(nèi)吞作用。我司提供的DiI-Ac-LDL，每個批次均經(jīng)過牛大動脈內(nèi)皮細胞和小鼠巨噬細胞的標(biāo)記檢測來評估產(chǎn)品的標(biāo)記特異性，從而保證結(jié)果的一致性。

LDL是由極低密度脂蛋白（VLDL）轉(zhuǎn)變而來，主要功能是把運輸?shù)饺砀魈幖毎\輸?shù)胶铣伤?，其可用于研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過程，尤其是在動脈粥樣硬化等疾病中，其血漿來源的LDL可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

乙?；?/span>LDL是修飾LDL中的一類，LDL含有未修飾的載脂蛋白，可以用來研究正常的轉(zhuǎn)運和內(nèi)吞作用。當(dāng)LDL載脂蛋白的賴殘基被乙?；揎椇?，LDL復(fù)合物不再與LDL受體結(jié)合，但是，修飾型LDL更容易與內(nèi)皮細胞和小膠質(zhì)神經(jīng)細胞的“scavenger”受體結(jié)合。因此，Ac-LDL可用來研究上述細胞的功能。

人源乙?；兔芏戎鞍祝?/span>Human Acetylated Low Density Lipoprotein,Human Ac-LDL），來自健康人源血漿LDL，Hepatitis C，HIV-I和HIV-II抗體檢測均為陰性。

我司提供的Human DiI-Ac-LDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-Ac-LDL，我們還提供不帶標(biāo)記的Ac-LDL，Ox-LDL（氧化修飾）以及不經(jīng)修飾的LDL等。

濃度：0.8-3.0mg/ml

外觀：乳狀液體

緩沖液組分（Buffer Components）：0.02mM EDTA in PBS,pH7.4
儲存條件：4℃，無菌避光，有效期6周

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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