產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
考馬斯亮藍(lán)快速染色液(8分鐘)	Commassie blue fast stain solution (8 mins)	8mL（125×）	CS-01F98145

實(shí)驗(yàn)室常使用考馬斯亮藍(lán)染色法對凝膠上分離的蛋白進(jìn)行染色，它既克服了氨基黑染色靈敏度不高的限制，又比銀染簡便易操作。目前廣泛用的考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，常用于蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

本品是基于考馬斯亮藍(lán)染色法對蛋白質(zhì)進(jìn)行染色而設(shè)計(jì)的，與傳統(tǒng)染色液相比，本品為新型PAGE膠染色試劑，不含甲醇，醋酸等有毒或有刺激性物質(zhì)，其獨(dú)特配方使得表面活性劑剝離，蛋白固定，蛋白染色，非蛋白區(qū)域著色屏蔽等功能同時(shí)進(jìn)行。8-10分鐘即可完成page膠上蛋白染色，無需脫色。染色分辨率與傳統(tǒng)染色方法分辨率相當(dāng)。染色的蛋白帶或蛋白點(diǎn)可進(jìn)行高效電洗脫，適用于蛋白質(zhì)譜分析。

儲存條件：室溫，有效期一年。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作。

2）用本產(chǎn)品4分鐘即可顯示出蛋白條帶，加長染色時(shí)間和增加染色次數(shù)，有利于提高染色靈敏度。

3）如果凝膠面積增大或者厚度增加，增加染色液和染色時(shí)間。
4）切忌長時(shí)間高功率加熱，否則會(huì)使溶液連續(xù)沸騰蒸發(fā)，造成凝膠干裂。如果不慎使凝膠干裂，可加入 50ml去離子水，高火加熱1min，低火加熱3-5min，可一定程度恢復(fù)干裂的PAGE膠，但染色效果有一定毀壞。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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