產(chǎn)品目錄

本試劑盒適用于快速檢測PAGE膠上的微量蛋白質(zhì)，它的敏感度幾乎可以達到銀染的敏感度（ng級水平或者更高），但是比銀染簡單、穩(wěn)定、重復性高。染色液所含有的成份和PAGE膠中的SDS、TRIS共同作用形成特殊復合物沉淀在膠基質(zhì)中形成白色的背景染色。有蛋白的地方，蛋白質(zhì)的存在干擾這種復合物沉淀的形成，因此蛋白條帶仍舊保持透明無色，在黑色的背景下，就可以清晰見到透明的蛋白條帶。

產(chǎn)品特點：

1.電泳后采用兩個簡單步驟，15分鐘內(nèi)完成全部過程。

2.環(huán)保染料，完全不含有各種醋酸、甲醇等有毒有刺激性成份。

3.蛋白條帶為不透明白背景上的透明條帶，靈敏度為傳統(tǒng)方法的10倍以上（納克級或者更高）。

4.可逆染色，完全不影響蛋白性質(zhì)，不影響抗體抗原結(jié)合性質(zhì)。如果需要可以脫色15分鐘后繼續(xù)做蛋白電洗脫（切下特定條帶脫色后洗脫下來可以用來做抗原生產(chǎn)使用）、定量、Western blot實驗、質(zhì)譜分析、N末端測序等。

5.在普通雙蒸水中可以保留一年以上，不退色，縮小，蛋白質(zhì)不擴散，一年后依然可以用來做Western blot等蛋白微分析。

操作步驟：

1. 染色

1) 電泳后用清水沖洗膠30-60 秒鐘，然后將PAGE 膠放置于一個透明的玻璃培養(yǎng)皿中，根據(jù)膠大小倒入適量的染色液（確保膠都浸沒在染色液內(nèi)，20-25ml 足夠染色一塊普通的8×10cm mini 膠了），搖床上輕搖染色10-15 分鐘(10-15%膠15 分鐘，5-7.5%膠可縮短時間到10 分鐘)。

2) 倒棄染色液，加入20-25ml 的顯色液，立刻同時用手輕搖膠顯色0.5-1 分鐘（將透明培養(yǎng)皿放在一個黑色（暗）背景上觀察條帶出現(xiàn)情況，此時在不透明的白背景上應(yīng)該看到透明的蛋白條帶，不要顯色時間過長，過長反而會降低分辨率）。

3) 看到滿意條帶后，用清水沖洗1-2 分鐘后，放置于蒸餾水中保存。

2. 脫色

1) 根據(jù)個人需要將所需目的條帶切下后或者直接整塊膠加入適量脫色液，搖床上輕搖10 分鐘或者直到脫色完全，后用清水沖洗幾次。

2) 現(xiàn)在膠可以用于蛋白電洗脫，Western blot 等操作，或者可以再用傳統(tǒng)方法染色。

儲存條件：室溫避光，有效期12個月。
本制品別名：可逆微量蛋白染色試劑盒|敏感可脫色PAGE膠蛋白染色試劑盒

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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