產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
改良BCA法蛋白定量試劑盒	Protein Quantitation Kit By BCA	200次\|500次\|2500次\|5000次	CS-01F98023

本試劑盒是在常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。眾所周知，二價(jià)銅離子在堿性的條件下，可以被蛋白質(zhì)還原成一價(jià)銅離子（biuret reaction），一價(jià)銅離子和獨(dú)特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個(gè)銅離子，形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。

試劑盒組份(500次)：

蛋白標(biāo)準(zhǔn)（5mg/mlBSA）—————0.5ml

溶液A—————————————50ml×2

溶液B—————————————2ml

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.步驟簡(jiǎn)單，45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典Lowry法快4倍而且更加方便。

2.靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml，小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg，待測(cè)樣品體積為1-20μl 。

3.BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。

4.在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

5.檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期1年。

本制品別名：BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑盒|BCA法蛋白濃度檢測(cè)試劑盒|改良BCA蛋白檢測(cè)試劑盒

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期1年。

本制品別名：BCA法蛋白濃度測(cè)定試劑盒|BCA法蛋白濃度檢測(cè)試劑盒|改良BCA蛋白檢測(cè)試劑盒

本試劑盒是在常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一Bradford法基礎(chǔ)上（考馬斯亮藍(lán)結(jié)合顯色法）改進(jìn)而成。當(dāng)Bradford染色液（考馬斯亮藍(lán)）和蛋白在酸性條件下結(jié)合時(shí)，大吸光值波長(zhǎng)立刻由465 nm轉(zhuǎn)移至 595nm，同時(shí)顏色由褐色轉(zhuǎn)為藍(lán)色，通過(guò)測(cè)定吸光值大小并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸光值，推算出蛋白濃度。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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