產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000	Lipofectamine 3000 Transfection Reagent(	0.75ml\|1.5ml	CS-01F97752

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000包含了我們?yōu)橄冗M(jìn)的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，能夠提供的轉(zhuǎn)染性能，改善相關(guān)應(yīng)用的結(jié)果及可重復(fù)性。此試劑具有優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率，并可提高細(xì)胞活性，廣泛適用于難轉(zhuǎn)染的及常見的細(xì)胞種類（例如HEK293和Hela細(xì)胞）。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000專門針對難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類進(jìn)行了優(yōu)化，能夠為廣泛的細(xì)胞種類提供的轉(zhuǎn)染性能。其可高效轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型包括：成纖維細(xì)胞（3T3、COS-7）成肌細(xì)胞（C2C12、L6 CRL-1458），肝細(xì)胞（HepG2、HuH7），紅白血病細(xì)胞（K562），乳腺癌（MCF7、Hs578T），前列腺癌（LNCap），肺癌細(xì)胞（A549、NCI-H460），骨肉瘤細(xì)胞（U-2 OS、Saos-2），結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco2、SW480），癌細(xì)胞（PANC-1），皮膚黑色素瘤細(xì)胞（SK-MEL-28）

對于常見的細(xì)胞種類而言，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000試劑相比其他試劑具有更高的濃度和更低的用量，從而為客戶帶來更好的性價比。1.5mL規(guī)格產(chǎn)品即足以完成多1500次的轉(zhuǎn)染反應(yīng)（24孔板中）。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000的脂質(zhì)體用量在很寬的動態(tài)范圍內(nèi)均能保持很高的轉(zhuǎn)染效率，可按需進(jìn)行簡便快速的條件優(yōu)化。在需要將細(xì)胞損傷降至低的相關(guān)應(yīng)用中，建議使用低毒的脂質(zhì)體用量（24孔板每孔使用0.75 μL）。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑3000適用于新型基因組編輯的相關(guān)應(yīng)用。通過高效率的轉(zhuǎn)染，它能夠增加TALEN或CRISPR系統(tǒng)剪切和重組的成功概率，終使得基因修飾的效率實現(xiàn)大化，并簡化后續(xù)處理步驟。

產(chǎn)品特點：

提供的性能：我們針對難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類實現(xiàn)了高轉(zhuǎn)染效率的試劑。

提高細(xì)胞活性：對細(xì)胞作用溫和，毒性很低。

功能多樣：同時適用于DNA、RNA及共轉(zhuǎn)染應(yīng)用。
保存條件：4℃，不可冷凍。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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