• 13585831301
  • 021-59541103 021-60443211
  • 3004967995

一步法定向表達試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F97677
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：198
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20次
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：一步法定向表達試劑盒現(xiàn)貨供應，價格實惠。

在線訂購  免費訂購熱線：021-59541103 021-60443211

標簽:一步法定向表達試劑盒 20次 

產(chǎn)品目錄

聯(lián)系我們

聯(lián)系人:高小姐

電話:021-59541103 021-60443211

手機:13585831301

Q Q： 3004967995

Email:3004967995@qq.com

詳細地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661

商品詳情購物流程代測服務付款方式常見問題

產(chǎn)品屬性： 

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

一步法定向表達試劑盒

One step directional expression Kit

20次

CS-01F97677

本試劑盒載體采用了世界先進的定向拓撲異構(gòu)酶克隆技術(shù)可以在5分鐘內(nèi)將待表達目的基因（高保真酶擴增的平末端片段）一步法定向克隆到高效pET增型載體，利用T7lac啟動子進行嚴謹調(diào)控，高效表達。

試劑盒組分：

載體————————————20μl

10×Enhancer————————20μl

試劑盒特點：

1. 簡單快速，加入待表達基因片段室溫僅需5分鐘便可完成原核表達載體構(gòu)建。

2. 定向克隆技術(shù)，過90%插入為正確方向插入，減少克隆篩選耗費的時間。

3. T7lac啟動子嚴謹調(diào)控本底表達，實現(xiàn)表達過程的可控和高效表達。

4. 氨芐抗性標記篩選，N端和C端6 ' Histag標簽方便表達后純化。

5. 帶腸激酶(EK)酶切位點，可以方便將標簽切除得到不帶標簽的蛋白。
儲存條件：-20℃，有效期半年。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

    您感興趣的產(chǎn)品*
    您的單位*
    聯(lián)系人*
    聯(lián)系電話*
    詳細地址*
    常用郵箱*
    請輸入您對我們的意見或建議*
    驗證碼*

同類產(chǎn)品

訂購流程

訂貨流程

產(chǎn)品訂購說明:

  

1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產(chǎn)品當天可發(fā)貨。

  

3、進口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結(jié)果。

7、產(chǎn)品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內(nèi)為您補發(fā) 損壞產(chǎn)品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發(fā)貨，報賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

  

賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業(yè)部

  

賬 號：2169 2341 6278

 為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個銀行的賬戶，學校、醫(yī)院客戶購買產(chǎn)品如因單位財務制度原因可先發(fā)貨待報賬后匯款，請及時告知銷售人員已做具體操作。