產(chǎn)品目錄

本試劑盒是一款快速可靠的的純化試劑盒，可從酶學反應中純化和濃縮高達5μg例如PCR、酶切、連接和反轉錄產(chǎn)物。該方法減少結合、漂洗和洗脫過程中的溫育和離心時間，5分鐘之內(nèi)即可完成純化實驗。DNA純化結合緩沖液用于稀釋樣本以確保DNA在高鹽環(huán)境下結合到專有的二氧化硅基質上。DNA純化漂洗緩沖液將酶、短鏈引物（≤40nt）、變性劑和其它小分子量的反應成分（如核苷酸，DMSO，甜菜堿）去除，從而實現(xiàn)更低體積的洗脫，得到高濃度高純度的DNA。

本試劑盒洗脫得到的DNA可以用于限制性酶切、DNA測序、連接反應和其它酶學等下游實驗。

產(chǎn)品特點：

洗脫體積低至6μL；

優(yōu)化設計過濾柱防止緩沖液和鹽分殘留。

流程優(yōu)化，試驗速度快至5分鐘完成DNA純化實驗。

產(chǎn)品應用：

PCR產(chǎn)物純化

有效去除PCR產(chǎn)物DNA中的聚合酶、引物、洗滌劑、dNTPs等。

酶切反應純化

有效去除限制酶及各種修飾酶(如連接酶、激酶、核酸酶、磷酸酶)，對DNA樣品脫鹽和濃縮。

cDNA純化

有效去除反轉錄酶和聚合酶以及核苷酸。

標記純化

有效去除未結合的放射性標記或熒光標記的核苷酸。

質粒純化

可用于純化和濃縮質粒，有效去除抑制劑及不必要污染物。

寡核苷酸純化

可用于純化單鏈DNA寡核苷酸(≥18nt)，dsDNA片段(≥15bp)，可有效去除小的寡核苷酸（6～12nt）。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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