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產品屬性:
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
RNase A(來源于牛胰腺) | Ribonuclease A from bovine pancreas | 100mg|1g | CS-01F96572 |
RNase A一種含4個二硫鍵的單鏈多肽,分子量約為13.7kDa(氨基酸序列)。作為一種核糖核酸內切酶(endoribonuclease),特異性降解單鏈RNA上的胞(C)或(U)殘基。具體來說,切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵,從而使得2’,3’-環(huán)磷酸水解為對應的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG經RNase A切割產生pG-pG-pCp和A-PG)。
RNase A切割單鏈RNA活性高,推薦工作濃度為1-100μg/mL,兼容于各種反應體系。低鹽濃度(0-100mM NaCl),可用來切割單鏈RNA,雙鏈RNA,以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而,高鹽濃度(≥0.3M),RNase A僅特異性切割單鏈RNA。
RNase A常見的應用在于質粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA,此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一,可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來滅活DNase活性。另外,本品還可用于RNA酶保護分析、RNA序列分析等分子生物學實驗。 貯存液制備: 此為RNase A儲存液配制的常用方法之一,也可以根據實驗室傳統(tǒng)的方法,或者參考文獻資料使用其他方法制備儲存液(如直接溶于10mM Tris-Cl,pH7.5或者Tris-NaCl溶液)。 1.利用10mM的醋酸鈉(pH5.2)制備10mg/mL的RNase A貯存液; 2.100℃加熱15min; 3.冷卻到室溫,加入1/10體積的1M Tris-HCl(pH7.4),調其pH至7.4(如:5mL 10mg/mL的RNase儲存液加入500μL 1M Tris-HCl,pH7.4); 4.分裝于-20℃凍存,可穩(wěn)定保存長達2年。
注意:在中性條件下煮沸RNase A溶液,會有RNase沉淀形成;在更低的pH下將其煮沸,如有沉淀可以觀察到,可能由于蛋白雜質存在造成。煮沸之后若發(fā)現沉淀,可通過高速離心(13,000rpm)去除雜質,然后分裝凍存。 |
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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