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產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 去內毒素質粒小量提取試劑盒(1～5mL) | Free Endotoxin Plasmid DNA Extraction Mini Kit(1-5mL) | 50T|100T | CS-01F96562 |
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA，可大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。研制的內毒素清除劑，可大限度地除去內毒素。從1～5mL大腸桿菌LB培養(yǎng)液中，可快速提取5～15μg高純度質粒DNA，提取率達85～90%。使用本試劑盒提取的質粒DNA純度高，可直接用于細胞轉染等要求較高的實驗，以及其他各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。
保存：常溫干燥保存，復檢期為一年。
注意：
| 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液P1在使用前先將試劑盒中提供的RNase A全部加入，混勻，置于2～8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。 操作步驟： 取1～5mL細菌培養(yǎng)物，12000rpm離心1min，吸除上清（菌液濃度較低時可多次離心收集到一個離心管中）。 向留有菌體沉淀的離心管中加入200μL溶液P1(請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。 注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。 向離心管中加入200μL溶液P2，溫和地上下翻轉6～8次使菌體充分裂解。 注意：混勻一定要溫和，以免污染細菌基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要過5min，以免質粒受到破壞。 向離心管中加入200μL溶液P3，立即溫和地上下翻轉6～8次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm 離心10min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。 注意：溶液P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。 加入上清1/5體積的冰上預冷的內毒素清除劑，振蕩混勻，溶液變渾濁，冰浴2min至溶液變清亮。 37℃水浴5min，不時振蕩，溶液又變渾濁。12000rpm室溫離心5min，溶液應分為兩相，上層水相含質粒DNA，下層油相含內毒素。 將含質粒DNA的上層水相轉移至新管，棄下層油相，注意不要吸入油狀相。重復步驟5～7三次。 加入600μL的溶液P4，充分混勻后加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50～200μL經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心1min。
為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min。 |
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司
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