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紅細胞裂解液A型(核酸純化)

  • 產品貨號：CS-01F96513
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：250mL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：紅細胞裂解液A型(核酸純化)現(xiàn)貨供應，價格實惠。

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標簽:紅細胞裂解液A型(核酸純化) 250mL 

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紅細胞裂解液A型(核酸純化)

Red Cell Lysis Solution,Type A

250mL

CS-01F96513

本品用于快速裂解哺乳動物全血中的紅細胞而基本不破壞白細胞和其他淋巴細胞的完整性。由于紅細胞是血液的主要細胞成份，不含DNA和RNA，其所含血紅素能抑制PCR反應，所以先用本產品裂解紅細胞，再提取基因組DNA或RNA 有助于提高所得樣品純度。

產品特點：

1.快速，一次處理只需要2-3分鐘。處理后提取血液DNA可以不需要酚/氯仿去蛋白質。

2.高效，一次處理能裂解80%以上的哺乳動物紅細胞，一般樣品多只需要處理兩次。

3.擴容性好，可以一次處理多達幾十毫升的樣品，也可以處理100μL的血液。

4. 兼容性好，可以與市場上大多數(shù)血液結合使用。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

1.在裝有抗凝血液的離心管中，按1:1的比例加入紅細胞裂解液A型并輕柔顛倒混勻。

2. 5000-10000 g室溫離心2分鐘，小心吸棄棄上清。

3. 將細胞沉淀重懸于1/2 體積的紅細胞裂解液A型中，輕柔吹打混勻后5000-10000g室溫離心2分鐘。

 

4.沉淀即為去除了紅細胞的血液細胞，可以直接用于后續(xù)的實驗。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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