產(chǎn)品目錄

本試劑盒是整合一管式病毒和一管式病毒RNA提取試劑盒兩產(chǎn)品而得，專門用于從血清(血漿)等液體樣品中同時(shí)提取病毒DNA(如HBV DNA)和病毒RNA(如HCV RNA和HIV RNA)的產(chǎn)品。本產(chǎn)品靈敏度高，穩(wěn)定性好，使用簡單快捷，尤其適合于整合到臨床PCR或RT-PCR 檢測(cè)試劑盒中。

試劑盒特點(diǎn)：

1. 回收率高，可以達(dá)到90%以上，高于絕大部分基于離心柱的提取方法?？梢愿?/span>QIAGEN的同類產(chǎn)品媲美。

2. 靈敏度高，通過PCR 檢測(cè)到病毒DNA的終靈敏度可以達(dá)到30 拷貝/mL樣品，通過RT-PCR 檢測(cè)到病毒RNA的終靈敏度可以達(dá)到50 拷貝/mL樣品。

3.一管式操作，減少了樣品污染的可能。

4.一站式套裝，除樣品外客戶不需要準(zhǔn)備任何試劑，降低了實(shí)驗(yàn)誤差。

5. 安全無毒，不需要使用和氯仿等有機(jī)溶液。

6.處理量大，如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理1.5mL液體病毒樣品。

7.與PCR、熒光PCR、RT-PCR、熒光RT-PCR等后續(xù)反應(yīng)兼容。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，溶液A4℃保存，溶液B和溶液C室溫保存，有效期一年。溶液B和溶液C具有揮發(fā)性，使用后需要將瓶蓋擰緊。

使用方法：

1. 將0.1-0.2mL液體樣品轉(zhuǎn)移到1.5mL 旋蓋離心管中。如果需要富集樣品中的病毒，可以先將1.5mL液體樣品轉(zhuǎn)移到1.5mL 旋蓋離心管中,然后4℃ 24,000 g離心60分鐘，移棄1.3mL上清液后繼續(xù)操作下一步的操作。

2. 加入0.6mL溶液A，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。

注意:溶液A用前需37℃-65℃水浴融化并充分搖勻后方可使用。

3.室溫靜置10分鐘。

4. 加入0.6mL溶液B，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。

5. 15000g室溫離心15分鐘。烈建議在離心管管壁上用記號(hào)筆做簡單標(biāo)記以區(qū)別離心面和向心面。

6.小心移棄上清。注意不要觸及管底的DNA和RNA沉淀。

7. 加入1.0mL溶液C，振蕩數(shù)秒后15000g室溫離心5分鐘。注意：將離心管放入離心機(jī)時(shí)一定要離心面向外。

8. 移棄上清，注意不要觸及管底的DNA和RNA沉淀。

9. 短暫離心數(shù)秒，注意：將離心管放入離心機(jī)時(shí)一定要離心面向外。

10.小心移棄殘留上清(殘留的溶液C會(huì)影響后續(xù)反應(yīng))。此時(shí)離心面的管壁上將有可見的膜狀沉淀。

11. 加入100-200μl溶液D，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液混濁或有少量不溶物是正?，F(xiàn)象。不要離心只取上清使用，因?yàn)椴蝗艹恋砦镏泻?/span>DNA和RNA，必須取混合液使用(哪怕很渾濁)。

12. 直接取適量樣品用于PCR或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項(xiàng)：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請(qǐng)您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對(duì)產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請(qǐng)輸入您對(duì)我們的意見或建議*
驗(yàn)證碼*