產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
柱式動(dòng)物小RNA提取試劑盒	RNasy Small RNA Isolation Kit with Spin Column	50次	CS-01F96472

本試劑盒是一種基于離心柱法從動(dòng)物組織或培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞中安全、快速、便捷、穩(wěn)定、高效、高質(zhì)量地抽提miRNA等小于200個(gè)核苷酸(nucleotide,nt)的小RNA(small RNA)的試劑盒。

本試劑盒抽提得到的小RNA可用于反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、qPCR、Northern等常規(guī)實(shí)驗(yàn)，也可以用于基因芯片分析、高通量測序等對小RNA質(zhì)量要求較高的情況。

試劑盒特點(diǎn)：

本試劑盒使用安全。

本試劑盒通過特殊的柱純化介質(zhì)進(jìn)行小RNA分離純化，不僅能有效避免傳統(tǒng)的Trizol法抽提時(shí)使用的酚、氯仿等有毒有害有機(jī)試劑，也能有效避免如國外的Q品牌等公司使用類似于Trizol的裂解液裂解樣品、接著使用氯仿分層、后續(xù)再進(jìn)行柱純化等涉及的有毒有害有機(jī)試劑。

本試劑盒使用快速、便捷。

本試劑盒采用柱純化，無需繁瑣的RNA沉淀步驟，抽提操作過程僅20-25分鐘。相比于傳統(tǒng)的Trizol抽提法，本試劑盒能夠有效去除大分子RNA，操作流程顯著簡化，縮短了抽提時(shí)間，降低了RNA降解的風(fēng)險(xiǎn)。和國外同類柱純化產(chǎn)品相比，所需操作步驟和操作時(shí)間基本一致。

本試劑盒抽提獲得的小分子量RNA得率高、純度好。

100萬培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞約能抽提得到1-2μg小RNA，5mg小鼠組織約能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常為2.0-2.2。

保存條件：室溫保存，一年有效。

注意事項(xiàng)：

對于富含RNase的樣品(如動(dòng)物組織)，建議使用前在裂解液中添加二硫蘇糖醇(Dithiothreitol,DTT)至終濃度為40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巰基乙醇至終濃度為1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巰基乙醇)，含DTT或β-巰基乙醇的裂解液可在室溫放置1個(gè)月。

本試劑盒提供的所有試劑和耗材都是RNase-free，操作時(shí)應(yīng)小心，避免被污染。所有自行準(zhǔn)備的試劑和耗材也都應(yīng)是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后高溫高壓滅菌并烘干。操作時(shí)應(yīng)避免對著樣品或所使用的試劑盒耗材呼氣或說話，以防RNase污染。建議戴一次性口罩操作。

對于操作環(huán)境中RNA酶的去除，推薦使用我公司的核酸酶清除劑(YT400)以去除實(shí)驗(yàn)桌面上或其它接觸面上的RNase。

使用凍存的細(xì)胞或組織抽提小RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來并剪切樣品中的RNA。對于組織樣品，推薦使用我公司的動(dòng)物組織RNA穩(wěn)定保存液進(jìn)行保存以保證樣品RNA的完整性。

本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。

廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。

結(jié)合液I、結(jié)合液II和洗滌液中含有乙醇，使用后須旋緊瓶蓋以防揮發(fā)，并須按照易燃試劑的相關(guān)規(guī)范進(jìn)行存放和使用。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項(xiàng)：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗(yàn)證碼*