產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱(chēng)	英文名稱(chēng)	規(guī)格	貨號(hào)
柱式病毒RNA提取試劑盒2.0	Column Virial RNA Isolation Kit 2.0	50次	CS-01F96406

本產(chǎn)品是在柱式病毒RNA提取試劑盒的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、專(zhuān)門(mén)用于從血清(血漿)或其他液體樣品中提取微量病毒RNA的升級(jí)產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程只需要20分鐘左右。

2.不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。

3.靈敏度高，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)到的終靈敏度低于50拷貝/mL，比柱式病毒RNA提取試劑盒更高。

4.安全無(wú)毒，不需要使用和氯仿等有機(jī)溶液。

5.如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理1.5mL液體病毒樣品。

6.與RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。

7.價(jià)廉物美，性?xún)r(jià)比遠(yuǎn)低于國(guó)外同類(lèi)產(chǎn)品。

8.適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無(wú)細(xì)胞材料。

產(chǎn)品組成：

組分編號(hào)

RNA病毒裂解液 BTN3073

柱式病毒RNA提取試劑盒溶液B BTN180602a

離心吸附柱（窄口） BTN60911

通用洗柱液 BTN60408

RNA洗脫液 BTN71207

保存條件：室溫保存，有效期一年。

使用方法：

1.在1.5mL離心管中加入0.2mL液體病毒樣品(如血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等)。如果病毒需要富集，可以將1.5mL液體在4℃下24000g冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL后繼續(xù)操作。

2.加入0.6mL RNA病毒裂解液，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。

? 注意：RNA病毒裂解液在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3.加入0.6mL柱式病毒RNA提取試劑盒溶液B，顛倒混勻。此時(shí)離心管中混合液的總體積是1.4mL。

4.將0.7mL混合液將轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

5.13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

6.再將剩余的0.7mL混合液將轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

7.13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

8.加入0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中，13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

9.13000g室溫離心半分鐘。

10.在離心吸附柱的濾膜的中部加入30μl RNA洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的1.5mL離心管中，室溫放置2分鐘。

11.13000g室溫離心1分鐘，離心管中收集的樣品即為RNA溶液。

12.RNA樣品可以直接用于RT-PCR或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，也可放-80℃長(zhǎng)期保存。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢(xún)

留言注意事項(xiàng)：

1.遵守中華人民共和國(guó)有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請(qǐng)您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對(duì)產(chǎn)品有任何疑問(wèn),也可以留言咨詢(xún)。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類(lèi)似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話(huà)*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請(qǐng)輸入您對(duì)我們的意見(jiàn)或建議*
驗(yàn)證碼*