產(chǎn)品及特點:
瓜蔞染料法PCR鑒定試劑盒是放線菌的一種,常常會在耳部等引起感染,感染具有多發(fā)性、復發(fā)性等特點,難以完全治愈,對人體健康造成較長時間的損害,因此檢測瓜蔞染料法PCR鑒定試劑盒具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR 原理開發(fā),它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 特異性高,引物是根據(jù)瓜蔞染料法PCR鑒定試劑盒高度保守區(qū)設計,不會擴增其他細菌。
3. 引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。
4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。
產(chǎn)品名稱 | 瓜蔞染料法PCR鑒定試劑盒 |
英文名稱 | Fructus trichosanthis |
規(guī)格 | 50次 |
貨號 | CSP914501 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:瓜蔞染料法PCR鑒定試劑盒一、制備標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果進行定量分析,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做定性分析,則 6 個標準曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。
數(shù)據(jù)處理 11. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 30。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 25。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 30 則為陰性,如果小于或等于 25 則為陽性。如果在 25-30 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct值如果大于或等于 30 則為陰性,如果小于 30,則為陽性
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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