產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品說明：Western blot 底物發(fā)光檢測試劑是一種高靈敏度的增強型化學(xué)發(fā)光底物試劑，采用獨特的發(fā)光底物系統(tǒng)，并對成份進行了優(yōu)化。產(chǎn)品背景低，穩(wěn)定性好，信號的靈敏度及強度高，發(fā)光時間持久。比普通 ECL 試劑敏感度高數(shù)十倍。用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶 HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原?？梢造`敏地檢測出目的蛋白的存在。它由辣根過氧化物酶(HRP)催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出熒光，可對×光膠片曝光，也可直接進行 lμminometer 檢測或者熒光 CCD 掃描。

產(chǎn)品特點：

1．高信噪比，背景低。

2．發(fā)光迅速。

3．可在日光燈下進行發(fā)光操作。

4．靈敏度高：可檢測 femto 級抗原。

5．發(fā)光持續(xù)時間長，可進行反復(fù)曝光，進行結(jié)果優(yōu)化，而不需重復(fù) Western blot。

6．節(jié)約抗體，包括一抗二抗。超敏化學(xué)發(fā)光檢測試劑因靈敏度高，可使用較高抗體稀釋比例。一抗稀釋 1:1000-1:5000或0.2-1.0μg/ml ；二抗稀釋 1:20000-1:100000或10-50ng/ μl。

使用方法：

1．執(zhí)行常規(guī) SDS－PAGE、轉(zhuǎn)膜和 Western Blot 步驟。

2．膜的封閉:用 TBS-T 液洗滌印跡膜 10minX2。放入 5%脫脂奶粉封閉液內(nèi)，搖床震動，室溫封閉1小時。

3．一抗孵育：去除封閉液，并加入稀釋好的一抗，用搖床震動，室溫孵育2h或4℃孵育過夜。

注意：最好使用推薦的一抗稀釋比例，稀釋一抗使用封閉液稀釋。

4．用 4-6倍 TBS-T洗滌印跡膜，10minX3。增加洗液量，和/或洗膜的次數(shù)可降低背景。

注意：洗滌之前，用 TBS-T洗液將印跡膜進行簡單的漂洗，將會增加洗膜的效果。

5．二抗孵育：將一抗孵育后的印跡膜放入適當(dāng)稀釋的HRP 標(biāo)記的二抗中孵育，搖床震動，室溫孵育2 小時。

注意：最好使用推薦的HRP 標(biāo)記二抗的稀釋比例，稀釋二抗使用封閉液稀釋。

6．重復(fù)第 4 步，以去除非特異性 HRP 標(biāo)記二抗的結(jié)合。

注意：與 HRP 標(biāo)記二抗孵育后，必須徹底地清洗印跡膜。

7．制備工作液：按每 1 ml 蒸餾水加 A 液和 B 液各 50μι，混勻組成作液即可使用。用量以充分覆蓋印跡膜為基準(zhǔn)。每10cm2膜需要大約1ml工作液。

8．將印跡膜有蛋白的一面朝上平整的鋪在一張平板上，加上配好的發(fā)光底物工作液。

9．將印跡膜與工作液孵育1-5min。

注意：孵育的時間可以在暗室里觀察，以判斷是否進行膠片曝光。

10．將一潔凈的保鮮膜或透明的玻璃紙平整的鋪在孵育有工作液的印跡膜上，只要保鮮膜或透明的玻璃紙比較大可以不用吸除多余的工作液，輕輕趕出其間的氣泡。

11．在暗室中取一張×膠片小心置于膜上，曝光 5 秒至 1分鐘，立即顯影定影。

注意：根據(jù)其發(fā)光的強度,縮短或延長×片的曝光時間(對微弱信號，曝光時間可延長至數(shù)小時),或者曝光一系列不同的時間后再顯影定影挑選一張滿意的。也可用合適的照相器材直接記錄蛋白膜的化學(xué)發(fā)光圖像。

超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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