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細胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，組織中的許多氨基酸殘基形成醛鍵、羧甲鍵而封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)也使抗原決定簇隱蔽。導(dǎo)致免疫染色時染色信號減弱，甚至出現(xiàn)一些假陽性染色結(jié)果。因此，對于石蠟切片，要求在進行 IHC 染色前，先進行抗原修復(fù)，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。EDTA 緩沖液是除檸檬酸緩沖液外另一種常用的IHC 抗原修復(fù)液。有部分抗原用 EDTA 緩沖液修復(fù)效果好于檸檬酸緩沖液。特別是對于某些核抗原效果會更明顯。

本抗原修復(fù)液采用了廣泛使用的EDTA，可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

通常石蠟切片都需進行抗原修復(fù)處理，而冰凍切片可以不進行抗原修復(fù)處理?？乖迯?fù)會大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對于冰凍切片的染色效果很多文獻資料表明也有顯著改善。特別是當冰凍切片免疫染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進行抗原修復(fù)。從原理上來看，無論冰凍切片還是細胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進行抗原修復(fù)都會有效去除蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

使用方法：

1．對于石蠟切片：

①切片脫蠟至水。

②3%H2O2處理切片10分鐘。

③自來水沖洗，蒸餾水洗。

④ 抗原修復(fù)：將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1×)中，95-100℃加熱約 15分鐘(加熱時間可以控制在 10-20分鐘內(nèi)，最佳的加熱時間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。如果使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在 20-30分鐘內(nèi)冷卻至室溫。PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。隨后即可進行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。

2．對于冰凍切片：

用免疫染色洗滌液洗滌切片 5分鐘。將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1×)中，95-100℃加熱約 15分鐘(加熱時間可以控制在 10-20分鐘內(nèi)，最佳的加熱時間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。如果微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在 20-30分鐘內(nèi)冷卻至室溫。PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。

3．對于其它樣品的抗原修復(fù)，可以參考石蠟切片或冰凍切片的步驟進行。

注意事項：

1.本抗原修復(fù)液使用前必須用重蒸水稀釋 10倍，配制成抗原修復(fù)液(1×)。

2.請使用足量的修復(fù)液，修復(fù)過程中保證組織切片完全浸沒在修復(fù)液中。

3.根據(jù)你的切片具體情況選擇修復(fù)時間，如組織粘片不牢，容易掉片，請酌情減少修復(fù)時間。

4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

EDTA抗原修復(fù)液(10×)細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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