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免疫染色實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞或組織往往需要經(jīng)多聚甲醛、甲醛或其他醛類固定來維持本身的形態(tài)結(jié)構(gòu)，然而此步操作通常會封閉抗原決定簇，使得相當(dāng)多的抗原不能與抗體很好的進(jìn)行反應(yīng)，從而引起染色信號衰減，甚至出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。引起抗原決定簇被掩蓋的原因在于：1）醛類固定劑導(dǎo)致組織上的許多氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成醛鍵，從而封閉抗原表位；2）醛類固定劑在固定過程中與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)（cross-link），形成醛交聯(lián)蛋白，導(dǎo)致抗原表位被封閉。因此，需要對固定組織進(jìn)行抗原修復(fù)（antigen retrieval，AR）來逆轉(zhuǎn)被掩蓋的抗原表位，使其重新暴露出來，恢復(fù)抗原表位-抗體的結(jié)合能力，從而改善染色效果。

抗原修復(fù)的方法非常多，主要有熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶誘導(dǎo)的抗原修復(fù)（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修復(fù)方法的選擇需要考慮到抗原表達(dá)程度、抗體要求、組織類型以及組織固定方法等因素。作為免疫染色至關(guān)重要的一步，抗原修復(fù)方法的選擇、溫度、pH值、修復(fù)時(shí)間、修復(fù)介質(zhì)都會影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系以及實(shí)驗(yàn)條件來選擇恰當(dāng)?shù)男迯?fù)溶液，從而達(dá)到最佳的修復(fù)效果。

本品為EDTA抗原修復(fù)緩沖液，pH8.0，是一款非常經(jīng)典且應(yīng)用廣泛的熱修復(fù)緩沖液之一，適用于大多數(shù)的抗原，經(jīng)此緩沖液修復(fù)后的染色信號明顯得以增強(qiáng)。本品特別適合用于石蠟切片，也可用于冰凍切片等其他樣本。本品為50×濃縮的EDTA抗原修復(fù)液，使用前需用ddH2O稀釋成1×工作液。按照每個(gè)片子需10ml抗原修復(fù)液的量來計(jì)算，約可做500個(gè)樣品。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）抗原修復(fù)通常用于醛類固定的石蠟切片，而冰凍切片由于組織比較脆弱，易在修復(fù)過程中被破壞掉，因此比較少進(jìn)行抗原修復(fù)。然而醛類固定的冰凍切片同樣會發(fā)生蛋白交聯(lián)而封閉抗原表位，導(dǎo)致染色效果不佳。很多文獻(xiàn)資料表明采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行冰凍切片抗原修復(fù)，也能顯著改善染色效果。特別是當(dāng)染色效果欠佳的前提下，可考慮進(jìn)行冰凍切片的抗原修復(fù)。

3）修復(fù)過程中一定要使用足量的修復(fù)液（1×）來完全浸沒組織切片。

4）不同pH的修復(fù)液對修復(fù)效果的影響很明顯，歸于傳統(tǒng)習(xí)慣使用檸檬酸鈉修復(fù)液，pH6.0（SY0763）比較多。目前很多資料表明絕大多數(shù)抗原（抗體），使用高pH值（約8.0或9.0）的修復(fù)液能得到更好的染色效果。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

EDTA抗原修復(fù)液(50×)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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