產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品說明：Bradford 蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據(jù) Bradford 染液(考馬斯亮藍 G-250 染料)與蛋白結(jié)合，使染料的最大吸收峰從 A456變?yōu)锳595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關(guān)系的原理設(shè)計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比 Lowry 法大約高四倍，最低蛋白檢測量可達 1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數(shù)樣品中化學試劑的影響。

注意事項：

1．各取樣操作應(yīng)準確無誤。

2．在100～1500μg/ml的濃度范圍線性最佳。

3．加入樣品后的試劑，混合均勻后，靜置反應(yīng)，測量過程中切不要再次劇烈晃動。

4．Bradford 染色液使用前，應(yīng)充分混勻。同時，酶標儀需預(yù)熱 20min。

5．Bradford 染色液需恢復(fù)到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。

6．每次試驗都必須建立標準曲線。另外，為了得到更精確的結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔。

7．Bradford法測定蛋白濃度對大多數(shù)化學物質(zhì)的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(詳情見附錄)對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA蛋白定量檢測試劑盒。

使用說明：

一、配制 BSA 標準品

標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。

但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 進行稀釋。

二、檢測方法

A．試管法檢測(線性范圍：100-1500μg/ml)

1.各取20μl不同濃度標準品和待測樣品加入到反應(yīng)管中；

2.加入1ml Bradford 染色液，混勻。室溫孵育10min。

3.分光光度計上測定 595nm 處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。

4.根據(jù) BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù))，繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/ml；Y-最終的OD595nm)。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

B．標準微孔板檢測(線性范圍：100-1500μg/ml)

1.各取 5μl 各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中；

2.每孔加入 250μl Bradford 染色液，振蕩 30s 充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。

3.酶標儀上測定595nm處的吸光度?；蛘咂渌?75~615nm波長范圍內(nèi)的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在~10%的損失。

注意：由于酶標板的光徑比比色皿短，經(jīng)酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm，可使用 7-10μl 標準品/待檢樣本，和 250μlBradford 染色液來進行檢測。

Bradford蛋白濃度測定試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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