產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品說明：SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer，1×)，是一種經(jīng)過改良的以溴酚藍為染料的蛋白上樣緩沖液?？梢灾苯佑糜诩?xì)胞或組織樣品的裂解，并用于后續(xù)常規(guī)的SDS-PAGE 蛋白樣品的上樣。使用 SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)直接裂解蛋白樣品的優(yōu)點是比較便捷；缺點是裂解好的蛋白樣品不能用常規(guī)的Bradford 法或BCA 法測定蛋白濃度。這樣蛋白上樣量的均一性就較難控制，需要借助考馬斯亮藍等的染色結(jié)果或

Western的檢測結(jié)果，來調(diào)整上樣量。當(dāng)細(xì)胞量或組織用量能控制得比較均一時，使用本裂解液直接裂解獲取蛋白樣品會比較便捷。

本產(chǎn)品也可以用于 SDS-PAGE 時待上樣蛋白樣品的稀釋等。

注意事項：

1．SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)中含少量 DTT，有輕微刺激性氣味，但不含劇毒的巰基乙醇。

2.SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)必須完全溶解后再使用。

使用說明：

1.在室溫或不超過 37℃的水浴中溶解 SDS-PAGE 上樣緩沖液(1×)。水浴溶解后立即室溫存放，盡量避免長時間置于水浴中。

2.對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升 SDS-PAGE 上樣緩沖液(1×)的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使 SDS-PAGE 上樣緩沖液(1×)和細(xì)胞充分接觸。通常 SDS-PAGE 上樣緩沖液

(1×)接觸細(xì)胞 1-2 秒后，細(xì)胞就會被裂解。裂解后的樣品收集到一潔凈離心管內(nèi)。

3.對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)的比例加入 SDS-PAGE 上樣緩沖液(1×)。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再進行裂解。

4.對于組織樣品：

A.把組織剪切成細(xì)小的碎片。

B.按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升 SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)的比例加入 SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少 SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(1×)的用量。)

C.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

D.充分裂解后，將樣品收集到一潔凈離心管內(nèi)。

說明：如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5.100℃或沸水浴加熱 5-10分鐘，以充分變性蛋白。說明：煮沸前通常會發(fā)現(xiàn)蛋白樣品內(nèi)有粘稠的半透明狀物體，通常在本上樣緩沖液內(nèi)沸水浴煮沸 8-10分鐘后可以確保該粘稠的半透明狀物體消失，以便于后續(xù)的上樣操作。

注意：如果起始時細(xì)胞或組織的用量較大，基因組 DNA 含量較高，煮沸 5-10分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體。此時需要再煮沸 5-10分鐘或者加入適量 1×的蛋白上樣緩沖液后再煮沸 3-5分鐘。充分煮沸后一方面可以使結(jié)合在基因組 DNA 上的蛋白充分釋放，同時會導(dǎo)致基因組 DNA的部分?jǐn)嗔褟亩拐吵砀邢?，這樣就不會影響后續(xù)的上樣操作了。

6.冷卻到室溫后，室溫稍離心一下以沉淀可能出現(xiàn)的雜質(zhì)等，上清即可直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內(nèi)即可。通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性)(1×)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請您真實的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產(chǎn)品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質(zhì)的信息或類似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*