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本試劑盒提供了一種在生理?xiàng)l件下通過(guò)熒光檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用傳統(tǒng)方法所需的放射性同位素。本試劑盒采用了可以穿透細(xì)胞膜的最新一代一氧化氮熒光檢測(cè)探針DAF-FM DA(3-amino,4-aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的條件下檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮合成酶可以催化產(chǎn)生的一氧化氮量，從而檢測(cè)出一氧化氮合成酶的活性。詳細(xì)的檢測(cè)原理參考圖1。采用一些一氧化氮合成酶的抑制劑則可以測(cè)定出特定類型的一氧化氮合成酶的活性。例如，采用iNOS抑制劑，未加iNOS抑制劑測(cè)定出來(lái)的酶活力減去加了iNOS抑制劑測(cè)定出來(lái)的酶活力就是iNOS的酶活力。

本試劑盒是目前為止世界上最先進(jìn)的一種一氧化氮合成酶檢測(cè)試劑盒。和Calbiochem等多年前就開(kāi)始提供的一氧化氮合成酶檢測(cè)試劑盒相比無(wú)需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于熒光的一氧化氮合成酶檢測(cè)試劑盒相比采用了最新一代的熒光探針，靈敏度更高，特異性更好。本試劑盒的缺點(diǎn)是和其它熒光法一氧化氮合成酶檢測(cè)試劑盒一樣，僅能提供一氧化氮合成酶的相對(duì)活性。

本試劑盒和檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)一氧化氮水平的不同之處在于提供了充足的底物L(fēng)-Arginine和一些可以穿透細(xì)胞膜的反應(yīng)輔助因子，確保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不會(huì)受底物的量或輔助因子的量的限制，從而可以測(cè)定出細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合成酶活力。

本試劑盒最適合用于貼壁的細(xì)胞或組織的一氧化氮合成酶的檢測(cè)，對(duì)懸浮細(xì)胞也可以進(jìn)行檢測(cè)。

試劑盒組份：

NOS檢測(cè)緩沖液(2X)————15ml

精氨酸溶液————————600μl

NADPH——————————2.3mg

DAF-FM DA(5mM)——————20μl

注意事項(xiàng)：

1. RPMI 1640等含有較高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液容易對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾，請(qǐng)盡量避免。

2. 由于檢測(cè)過(guò)程中有還原反應(yīng)，凡是影響還原反應(yīng)的氧化或還原試劑要注意避免，例如常用的還原劑DTT和巰基乙醇。

3. DAF-FM DA在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期6個(gè)月。

一氧化氮合成酶檢測(cè)試劑盒(熒光法)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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