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熒光染料Hoechst33342 能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst33342 比正常細(xì)胞的多，熒光強度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA 的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33342 排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強。而PI 染料是不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞中，即活細(xì)胞對PI 染料拒染，而壞死細(xì)胞由于膜完整性在早期即已破損，可被PI 染料染色。

用Hoechst33342 結(jié)合PI 染料對凋亡細(xì)胞進(jìn)行雙染色，就可在流式細(xì)胞儀上將正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞區(qū)別開來。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點圖上，這三群細(xì)胞表現(xiàn)分別為：正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色（Hoechst33342+/PI+），凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色（Hoechst33342++/PI+），壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色（Hoechst33342+/PI++）

注意事項

1. 在紅色熒光對蘭色熒光散點圖上，還可見到細(xì)胞凋亡區(qū)向細(xì)胞壞死區(qū)遷移的軌跡，可能是凋亡細(xì)胞的DNA 進(jìn)一步降解的緣故。

2. 用Hoechst33342 染料與細(xì)胞孵育的時間不宜過長，一般控制在20min 之內(nèi)為宜。如果太長可引起Hoechst33342 的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光的遷移，導(dǎo)致紅色熒光與蘭色熒光的比例改變，從而影響結(jié)果的判斷。

3. Propidium Iodide（PI）有毒，操作時要戴手套。

儲存：2-8℃，避光，有效期一年。

Hoechst 33342/PI雙染試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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