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BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP 會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會(huì)和NBT 發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測(cè)。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。

組份規(guī)格：

試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml

試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl

試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl

使用說(shuō)明

1. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針?lè)跤螅眠m當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。

2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL

3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24 小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對(duì)于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。

儲(chǔ)存：4℃，有效期一年。

BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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