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DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結合后，最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。

操作步驟：

1、對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行DAPI染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的DAPI染色。

2、對于貼壁細胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。

3、室溫放置3-5分鐘。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

注意事項：

1、本DAPI染色液的濃度經過優(yōu)化，確?？梢詽M足各種常規(guī)染色的需要。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

儲存條件：-20℃避光，有效期12個月。

即用型DAPI染色液細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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