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Cell Counting Kit-8(簡(jiǎn)稱 CCK-8)試劑盒廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)，它對(duì)細(xì)胞無明顯毒性，在電子載體的作用下被細(xì)胞線粒體中的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進(jìn)行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan?？梢杂糜诖笈繕悠返臋z測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1．第一次做實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

2．接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。

3．培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。

4．建議采用多通道移液器，減少平行孔間的誤差，加 CCK-8時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，干擾OD值。

5．若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或PH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加CCK-8,含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測(cè)定。

6．CCK-8 對(duì)細(xì)胞的毒性非常低，其他的實(shí)驗(yàn)，例如中性紅法或結(jié)晶紫法，也可在CCK-8法檢測(cè)完后繼續(xù)進(jìn)行。

7．可以使用大于600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定，CCK-8在參比波長(zhǎng)處沒有吸光值，設(shè)定參比波長(zhǎng)的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。

8．如果實(shí)驗(yàn)中待測(cè)物質(zhì)有氧化還原劑，在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入CCK-8試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較(只加CCK-8試劑)，如果O.D值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。

9．加 CCK-8試劑時(shí)速度要快，減少試劑在移液器上的殘留，加入CCK-8試劑后輕輕震培養(yǎng)板，為了避免加樣時(shí)由于CCK-8殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。

10.CCK-8 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

所需材料：10μl，100-200μl以及多通道移液器

96 孔培養(yǎng)板

CO2培養(yǎng)箱

帶有 450nm 濾光片的酶標(biāo)儀

使用方法：

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

1．先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2．按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6個(gè)復(fù)孔。

3．接種后培養(yǎng) 2-4 小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)線可以測(cè)定未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間)。

CCK-8試劑盒/Cell Counting Kit-8細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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