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其檢測原理為：在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細胞中，PS從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。

另外，本試劑盒中提供的7-AAD可用來區(qū)分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。7-AAD是一種核酸染料，同PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射光譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品，可與Annexin V聯(lián)合使用。該染料不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可穿透晚期凋亡細胞或者壞死細胞并與其內(nèi)的DNA結(jié)合。因此將Annexin V-APC與7-AAD聯(lián)合使用時，7-AAD則被排除在活細胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Annexin V-APC和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性（Annexin V+/7-AAD+）。

試劑盒組份：

重組人Annexin V/APC*（rh Annexin V/APC）———100µl

7-AAD Viability Staining Solution——————100µl

1×Binding buffer——————————————10ml

注意事項

1）試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2） 7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿防護服、戴手套等；

3）推薦使用懸浮培養(yǎng)細胞。若是貼壁細胞，建議使用不含EDTA的胰酶消化，如果消化不當，可能引起假陽性；若用細胞刮子則會造成細胞黏連成團而影響檢測?？蓪⒁让赶蟮募毎４嬗诤?% BSA的PBS中，防止進一步的損傷。

4）本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不應(yīng)低于1×105，不推薦用于組織樣本檢測。

5）請勿固定樣品，細胞固定后可能導(dǎo)致熒光的猝滅；

6）因檢測細胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡細胞處理的細胞作為陰性對照，并進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。

7）如果樣品來源于血液，請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結(jié)合，從而干擾實驗結(jié)果?？梢允褂煤蠩DTA的緩沖劑并低速離心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V結(jié)合緩沖液清洗細胞，以避免殘留的EDTA會螯合Ca2+。

8） Annexin V-APC和7-AAD是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。

9）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

儲存條件：4℃，有效期一年。

AnnexinV-APC/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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